Question

番茄含有豐富的維生素，但不耐儲存，研究者發(fā)現(xiàn)一種耐儲存基因能使果實長期儲存，想用基因工程的方法把耐儲存基因轉(zhuǎn)入到番茄體內(nèi)．回答下列問題：
（1）用PCR技術(shù)擴增耐儲存基因．PCR反應(yīng)體系的配方為：磷酸緩沖液，四種脫氧核苷酸，兩種引物，耐高溫的DNA聚合酶，

 

．在PCR技術(shù)中，耐高溫的DNA聚合酶只能特異地復(fù)制處于

 

，使這段固定長度的序列呈指數(shù)擴增．
（2）用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法把耐儲存基因?qū)�入番茄的體細胞中．把耐儲存基因插在Ti質(zhì)粒的T-DNA中構(gòu)建含耐儲存基因的重組Ti質(zhì)粒，然后把含耐儲存基因的重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌中，通過

 

的作用就可以把含耐儲存基因的農(nóng)桿菌篩選出來，再用這樣的農(nóng)桿菌去感染番茄體細胞，借助T-DNA的作用就可以把耐儲存基因插入到番茄體細胞的染色體DNA上．
（3）用

 

將含耐儲存基因的番茄體細胞培養(yǎng)成番茄植株，該番茄植株體細胞含耐儲存基因，用

 

的方法可以檢測出耐儲存基因在番茄果實細胞中是否完成表達．

Answer 1

考點：PCR技術(shù)的基本操作和應(yīng)用,基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：1、PCR反應(yīng)體系的配方是：10倍濃縮擴增緩沖液5ml，20mmol/L的四種脫氧核苷酸的等量混合液1ml，20umol/L的兩種引物各2.5uL，水28～33ml，1～5umol/L的高溫的DNA聚合酶，模板DNA；
2、PCR反應(yīng)過程中DNA聚合酶只能特異性的復(fù)制處于兩個引物之間的DNA序列，使這段固定長度的序列呈知識擴增；
3、將含耐儲存基因的番茄體細胞培養(yǎng)成番茄植株的原理是細胞的全能性，應(yīng)用的技術(shù)是植物組織培養(yǎng)．

解答： 解：（1）PCR反應(yīng)體系配方除了磷酸緩沖液，四種脫氧核苷酸，兩種引物，耐高溫的DNA聚合酶之外，還應(yīng)該有模板DNA；在PCR技術(shù)中，耐高溫的DNA聚合酶只能特異地復(fù)制處于兩個引物之間的DNA序列，使這段固定長度的序列呈指數(shù)擴增．
（2）由于質(zhì)粒中含有標(biāo)記基因，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌中具有標(biāo)記基因，因此可以通過檢測標(biāo)記基因把含耐儲存基因的農(nóng)桿菌篩選出來．
（3）將導(dǎo)入耐儲存基因的番茄體細胞培養(yǎng)成番茄植株所用的技術(shù)是植物組織培養(yǎng)；用抗原-抗體雜交的方法可以檢測出耐儲存基因在番茄果實細胞中是否完成表達．
故答案為：
（1）DNA模板（耐儲存基因）    兩個引物之間的DNA序列
（2）標(biāo)記基因
（3）植物組織培養(yǎng)技術(shù)    抗原-抗體雜交

點評：本題的知識點是PCR技術(shù)及應(yīng)用，基因工程技術(shù)及應(yīng)用，植物組織培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用，旨在考查學(xué)生理解所學(xué)知識的要點，把握知識的內(nèi)在聯(lián)系并應(yīng)用相關(guān)知識綜合解決問題的能力．