Question

1．科學(xué)家從某無(wú)限增殖細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中分離出無(wú)限增殖調(diào)控基因（prG），該基因能激發(fā)細(xì)胞分裂，這為單克隆抗體的制備提供了新思想．某國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備探索利用基因工程生產(chǎn)單克隆抗體，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）實(shí)驗(yàn)室已獲得無(wú)限增殖調(diào)控基因（prG）．在體外，可采用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增該目的基因．該技術(shù)的基本反應(yīng)過(guò)程：目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合，然后在DNA聚合酶的作用下進(jìn)行延伸，如此重復(fù)循環(huán)多次．該技術(shù)的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物．
（2）該基因工程操作的核心是基因表達(dá)載體的構(gòu)建．本研究中，受體細(xì)胞為（經(jīng)抗原刺激）B細(xì)胞，欲將目的基因轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞，常采用顯微注射方法．若實(shí)驗(yàn)成功，則受體細(xì)胞既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生抗體．
（3）制備單克隆抗體通常選用細(xì)胞融合技術(shù)，使（經(jīng)抗原刺激）B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，融合成功的細(xì)胞經(jīng)過(guò)篩選就是所需要的雜交瘤細(xì)胞．

Answer 1

分析 1、基因工程操作的四個(gè)基本步驟是：獲取目的基因，基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞和目的基因的檢測(cè)與鑒定．當(dāng)動(dòng)物細(xì)胞作受體細(xì)胞時(shí)，一般采用顯微注射法將目的基因?qū)�入�?br />2、PCR原理：在解旋酶作用下，打開(kāi)DNA雙鏈，每條DNA單鏈作為母鏈，以4中游離脫氧核苷酸為原料，合成子鏈，在引物作用下，DNA聚合酶從引物3'端開(kāi)始延伸DNA鏈，即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的．實(shí)際上就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制過(guò)程．DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈．

解答 解：（1）PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)．PCR的原理是DNA復(fù)制，需要的條件包括：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）．PCR擴(kuò)增DNA的過(guò)程包括：高溫變性、低溫復(fù)性、中溫延伸過(guò)程．因此，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過(guò)程中，目的基因受熱形成單鏈并與引物結(jié)合，在Taq聚合酶的作用下延伸形成DNA．
（2）基因工程操作的四個(gè)基本步驟是：獲取目的基因，基因表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞和目的基因的檢測(cè)與鑒定．其中核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建．抗體是由已獲得免疫的（經(jīng)抗原刺激）B細(xì)胞分泌的，將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞常采用的方法是顯微注射法，若實(shí)驗(yàn)成功，則受體細(xì)胞既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生抗體．
（3）制備單克隆抗體通常選用細(xì)胞融合技術(shù)，使（經(jīng)抗原刺激）B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，融合成功的細(xì)胞經(jīng)過(guò)篩選就是所需要的雜交瘤細(xì)胞．
故答案為：
（1）PCR  變性    延伸   一段已知目的基因的核苷酸序列
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建  （經(jīng)抗原刺激）B細(xì)胞  顯微注射   無(wú)限增殖  產(chǎn)生抗體
（3）（經(jīng)抗原刺激）B    骨髓瘤   雜交瘤

點(diǎn)評(píng) 本題主要考查PCR技術(shù)、基因工程、單克隆抗體的制備等知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)書(shū)本知識(shí)的掌握和靈活運(yùn)用能力，屬于基礎(chǔ)題．