Question

13．Ⅰ．人們日益關注食品安全．一種保鮮劑-青鮮素，能抑制植物細胞生長與分裂，從而抑制發(fā)芽，被用于蔬菜和水果的保鮮，但其殘留物會損害人體健康，科研人員以小鼠我實驗材料，用“動物細胞培養(yǎng)技術”對青鮮素毒性進行了檢測
培養(yǎng)前，對所取小鼠組織需用胰蛋白酶（膠原蛋白酶）處理，制成細胞懸液；培養(yǎng)時，需向培養(yǎng)液中通入5%的CO₂，其目的是調節(jié)pH；為提供全面的營養(yǎng)，培養(yǎng)液中常常還需要加入動物血清（或血漿）等一些天然成分
檢測青鮮素毒性的實驗結果如表：

培養(yǎng)瓶編號	1	2	3	4	5	6
青鮮素濃度（mg/L）	0	10	30	90	270	810
變異細胞比例	0	0	$\frac{1}{1{0}^{6}}$	$\frac{1}{1{0}^{6}}$	$\frac{2}{1{0}^{6}}$	$\frac{8}{1{0}^{6}}$

實驗結論：低濃度的青鮮素毒性很小，濃度90mg/L以上毒性增加明顯
Ⅱ．為驗證某種中藥牙膏是否像其廣告宣傳的一樣具有較強的抑菌功效，某生物興趣小組的同學設計了如下實驗（符合無菌操作要求），請分析下述實驗過程并回答下列問題．
①用無菌水漱口，向漱口液中加入適量的該中藥牙膏；
②配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基；
③將上述樣品接種到培養(yǎng)基上，在適宜條件下進行培養(yǎng)；
④一段時間后，對培養(yǎng)結果進行觀察并進行菌落計數
（1）制備牛肉青蛋白胨固體培養(yǎng)基的一般步驟是：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板；培養(yǎng)基在分裝前往往要采用高壓蒸汽滅菌法滅菌
（2）本實驗樣品接種時最好采用稀釋涂布平板法．培養(yǎng)一段時間后，培養(yǎng)基表面長出菌落，每一個標準菌落來源于樣品中的一個活菌
（3）證明所用培養(yǎng)基已經徹底滅菌的方法是：對未接種的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，如無菌落出現，則證明培養(yǎng)基已徹底滅菌．

Answer 1

分析 1、分析表格，自變量是添加劑中青鮮素濃度，因變量是變異細胞比例，其中第一組是對照組，其它是實驗組．
2、培養(yǎng)基在分裝前往往要進行高壓蒸汽滅菌．接種方法有平板劃線法、稀釋涂布平板法等，由于此樣品用固體培養(yǎng)基接種且培養(yǎng)一段時間后，培養(yǎng)基表面長出菌落，所以接種最好采用稀釋涂布平板法；菌落是由單個細菌（或其他微生物）細胞或一堆同種細胞在適宜固體培養(yǎng)基表面或內部生長繁殖到一定程度，形成肉眼可見的子細胞種群．檢測大腸桿菌一般使用伊紅-美藍培養(yǎng)基．實驗設計要遵循對照原則和單一變量原則．

解答 解：Ⅰ動物細胞培養(yǎng)時，所取小鼠組織需用胰蛋白酶（膠原蛋白酶）處理，制成細胞懸液；培養(yǎng)時，需向培養(yǎng)液中通入5%的C0₂，其目的是調節(jié)pH，為提供全面的營養(yǎng)，培養(yǎng)液中常常還需要加動物血清（或血漿）．
檢查青鮮素的毒性，通常用變異細胞占全部正常細胞的百分數作為指標．最后得出結論：濃度在10 mg/L以下沒有影響，大于90mg/L毒性增加明顯．
Ⅱ（1）培養(yǎng)基在分裝前往往要進行高壓蒸汽滅菌．
（2）因為此樣品用固體培養(yǎng)基接種且培養(yǎng)一段時間后，培養(yǎng)基表面長出菌落，所以接種最好采用稀釋涂布平板法；菌落是由單個細菌（或其他微生物）細胞或一堆同種細胞在適宜固體培養(yǎng)基表面或內部生長繁殖到一定程度，形成肉眼可見的子細胞種群．
（3）證明所用培養(yǎng)某已經徹底滅菌的方法是對未接種的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，如無菌落出現，則證明培養(yǎng)基已徹底滅菌．
故答案為：
Ⅰ胰蛋白酶（膠原蛋白酶）    調節(jié)pH     動物血清（或血漿）
結論：低濃度的青鮮素毒性很小，濃度90mg/L以上毒性增加明顯
Ⅱ高壓蒸汽滅菌
（2）稀釋涂布平板　 一個活
（3）對未接種的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，如無菌落出現，則證明培養(yǎng)基已徹底滅菌

點評 本題考查動物細胞培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)及實驗設計的相關知識，意在考查考生的識記能力和能理解所學知識的要點的能力．