Question

【題目】基因治療主要選擇腺相關(guān)病毒（簡(jiǎn)稱AAV）作為基因載體（見圖1）．AAV是DNA小病毒，衣殼不能包裝較大DNA分子．其基因組含有衣殼基因rep和復(fù)制相關(guān)蛋白基因cap等，但缺乏DNA復(fù)制激活基因E，感染細(xì)胞后不會(huì)復(fù)制增殖，對(duì)人體安全．當(dāng)人體細(xì)胞同時(shí)感染含有基因E的DNA病毒如腺病毒（AD）后，AVV會(huì)復(fù)制增殖，形成具有侵染力的病毒粒子（含DNA和衣殼）．

血友病是由于基因TPO突變而不能合成凝血因子，導(dǎo)致機(jī)體出血．目前治療的方法主要有兩種（如圖2），一是將基因工程菌生產(chǎn)的凝血因子注入患者體內(nèi)，補(bǔ)充凝血因子；二是用含重組AVV的病毒粒子感染患者

（1）在質(zhì)粒重組之前需要進(jìn)行的操作是_____。

（2）重組AAV中去除了基因rep、cap，目的是_____；重組AAV轉(zhuǎn)染細(xì)胞產(chǎn)生病毒粒子，需要人工重組輔助質(zhì)粒，這是因?yàn)?/span>_____。

（3）比較兩種治療法，說出用重組AAV病毒粒子感染治療的優(yōu)點(diǎn)：_____

（4）實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用昆蟲細(xì)胞、酵母菌、人體細(xì)胞承擔(dān)重組質(zhì)粒與重組AAV的轉(zhuǎn)染，都能收集到凝血因子，這一現(xiàn)象說明_____。

（5）病毒粒子可能含有重組AAV或人工重組輔助質(zhì)粒，就需要檢驗(yàn)、提純，檢驗(yàn)可以用酶切結(jié)合電泳法．已知腺相關(guān)病毒（AAV）與人體DNA片段的EcoRI與BamHI的酶切位點(diǎn)如圖2所示，兩種酶分開切的電泳圖如圖3所示．則用這兩種酶作用于重組AAV，電泳圖正確的是_____.

Answer 1

【答案】獲取大量的目的基因 重組AAV不能在人體大量復(fù)制，提高安全性，并保證AAV能結(jié)合較大目的基因片段 輔助質(zhì)粒能提供腺相關(guān)病毒（AAV）復(fù)制所用酶以及衣殼蛋白的基因 凝血因子進(jìn)入人體內(nèi)，由于代謝而導(dǎo)致數(shù)量下降，必須不斷注射，而病毒所攜帶的目的基因能在患者體內(nèi)長(zhǎng)期生產(chǎn)凝血因子，不需要經(jīng)常注射 生物共用一套遺傳密碼子 B

【解析】

基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的獲取，②基因表達(dá)載體的構(gòu)建，③將目的基因?qū)�人受體細(xì)胞，④目的基因的檢測(cè)與鑒定。

（1）在質(zhì)粒重組之前需要進(jìn)行的操作是獲取大量的目的基因。

（2）rep為病毒衣殼基因、cap為病毒復(fù)制相關(guān)蛋白基因，重組病毒去除這兩種基因后不能在人體大量復(fù)制，提高安全性，又因?yàn)?/span>AAV病毒衣殼不能包裝較大DNA分子，所以去除后保證AAV能結(jié)合較大目的基因片段。

（3）結(jié)合圖形可知，凝血因子進(jìn)入人體內(nèi)，由于代謝而導(dǎo)致數(shù)量下降，必須不斷注射，而病毒所攜帶的目的基因能在患者體內(nèi)長(zhǎng)期生產(chǎn)凝血因子，不需要經(jīng)常注射。

（4）在不同的生物體細(xì)胞中，相同的重組AAV轉(zhuǎn)染都能獲得相同的蛋白質(zhì)，說明生物共用一套遺傳密碼。

（5）根據(jù)題意，兩種酶都使用可將重組AAV切割成四段，且總DNA片段長(zhǎng)度為1230pp。故選B。