Question

【題目】在培育轉(zhuǎn)基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因(kan)常作為標(biāo)記基因，只有含卡那霉素抗性基因的細(xì)胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長。下圖為獲得抗蟲棉的技術(shù)流程。請據(jù)圖回答：

(1)A過程需要的酶有： 。

(2)將目的基因?qū)�入植物體細(xì)胞除了上述農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法之外，還可用 法（任填一種）；可用 技術(shù)檢測轉(zhuǎn)基抗蟲棉是否成功表達(dá)出Bt毒蛋白；除抗蟲基因外，基因表達(dá)載體中還必須包含的部分是 （至少寫出兩點）。

(3)由外植體培養(yǎng)為轉(zhuǎn)基因植株的D、E過程分別為 ，該過程的理論基礎(chǔ)是

。

(4)已知BamHⅠ與BglⅡ的識別序列及切割位點如圖所示：

用這兩種酶和DNA連接酶對一段含有數(shù)個BamHⅠ和BglⅡ識別序列的DNA分子進(jìn)行反復(fù)的切割、連接操作，若干循環(huán)后，和 序列將明顯增多。

Answer 1

【答案】（1）限制酶、DNA連接酶

(2)基因槍法（花粉管通道法） 抗原抗體雜交 啟動子、終止子、標(biāo)記基因（寫兩個）

(3)脫分化、再分化 細(xì)胞全能性 （4）

【解析】（1）A過程表示構(gòu)建基因表達(dá)載體，此過程需要先用同種限制酶處理質(zhì)粒和含有抗蟲基因的外源DNA分子以產(chǎn)生相同的黏性末端，再用DNA連接酶將切割好的質(zhì)粒和目的基因連接形成重組DNA分子。

（2）將目的基因?qū)�入植物體細(xì)胞除了上述農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法之外，還可用基因槍法或花粉管通道法；可以抗原-抗體雜交技術(shù)目的基因是否表達(dá)；除抗蟲基因外，基因表達(dá)載體中還必須包含啟動子、終止子、標(biāo)記基因等部分。

（3）由外植體培養(yǎng)為轉(zhuǎn)基因植株的過程需要用到植物組織培養(yǎng)技術(shù)，所以D、E過程分別為脫分化、再分化；該過程的理論基礎(chǔ)是細(xì)胞全能性。

（4）根據(jù)題圖和題意可知，BamHⅠ切割后形成的黏性末端是，BgIⅡ切割后形成的黏性末端是。由于兩種限制酶切割形成的黏性末端相同，因此黏性末端的連接方式有四種：兩種自身黏性末端連接、兩種黏性末端互連。由于兩種自身連接形成的序列仍然可以被這兩種限制酶切割，而兩種黏性末端互連形成的序列這兩種限制酶無法再識別切割，因此若干循環(huán)之后和這兩種序列將明顯增多。