Question

【題目】選用豬、牛、羊或其他脊椎動(dòng)物的血液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，來(lái)提取和分離血紅蛋白。

（1）實(shí)驗(yàn)前取新鮮血液，要在采血器中預(yù)先加入檸檬酸鈉，取血回來(lái)，馬上進(jìn)行離心，收集血紅蛋白溶液。加入檸檬酸鈉的目的是__________________。

（2）在對(duì)樣品進(jìn)行處理時(shí)，主要包括__________、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液、透析等步驟。其中透析技術(shù)的原理是______________________。

（3） 利用凝膠色譜法進(jìn)行血紅蛋白的分離，基本原理是__________________(填“相對(duì)分子質(zhì)量大”或“相對(duì)分子質(zhì)量小”)的蛋白質(zhì)，路程較短，移動(dòng)速度較快。

Answer 1

【答案】防止血液凝固 紅細(xì)胞的洗滌 小分子可以自由進(jìn)出透析袋(半透膜)，而大分子不能通過(guò) 相對(duì)分子質(zhì)量大

【解析】

1、電泳的原理：待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小、性狀不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。

2、凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理：凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小來(lái)分離蛋白質(zhì)的有效方法，相對(duì)分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程長(zhǎng)，移動(dòng)的速度慢，相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)不容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程短，移動(dòng)的速度快，因此相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)得以分離。

3、血紅蛋白的提取與分離的實(shí)驗(yàn)步驟主要有：

（1）樣品處理：①紅細(xì)胞的洗滌（低速短時(shí)間離心），②血紅蛋白的釋放（需要加入蒸餾水和甲苯），③分離血紅蛋白（中速長(zhǎng)時(shí)間離心）。

（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析．

（3）純化：調(diào)節(jié)緩沖液面→加入蛋白質(zhì)樣品→調(diào)節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質(zhì)．

（4）純度鑒定--SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。

（1）加入檸檬酸鈉的目的是防止血液凝固。

（2）對(duì)樣品的處理包括紅細(xì)胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液、透析等步驟．透析的原理是小分子可以自由進(jìn)出透析袋（半透膜），而大分子不能通過(guò)，這樣可以除去相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)。

（3） 利用凝膠色譜法進(jìn)行血紅蛋白分離的基本原理是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小來(lái)分離蛋白質(zhì)。其中相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)，路程較短，移動(dòng)速度較快，相對(duì)分子質(zhì)量小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程長(zhǎng)，移動(dòng)的速度慢。