Question

11．研究人員將人工絲蛋白基因?qū)�入到蠶卵內(nèi)，對蠶卵的基因改造獲得成功．含有人工絲蛋白的蠶繭發(fā)出綠色熒光，比正常的蠶繭更加輕�。�請回答下列問題：
（1）進行轉(zhuǎn)基因操作前，需用胰蛋白（或膠原蛋白）酶短時處理幼蠶組織，以便獲得單個細胞．將人工絲蛋白基因?qū)�入到蠶卵體內(nèi)，常用的方法是顯微注射法．
（2）綠色熒光蛋白基因可以作為標記基因，用于鑒別和篩選蠶卵中是否含有人工絲蛋白基因．
（3）采用PCR技術可驗證干擾素基因是否已經(jīng)導人家蠶細胞．PCR技術利用的原理是DNA雙鏈復制，該PCR 反應體系的主要成分應該包含擴增緩沖液（含Mg²⁺）、水、4種脫氧核苷酸、模板DNA、Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）和引物．
（4）生物反應器培養(yǎng)家香細胞時會產(chǎn)生接觸抑制，所以培養(yǎng)時通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應器 中，這樣可以通過增大細胞貼壁生長的附著面積來增加培養(yǎng)的細胞數(shù)量，也有利于空氣交換．

Answer 1

分析 1、基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、動物細胞培養(yǎng)過程：取動物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細胞用酶分散為單個細胞，制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)．

解答 解：（1）動物細胞培養(yǎng)時，首先需要用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）處理幼蠶組織，以便獲得單個細胞．將目的基因（人工絲蛋白基因）導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法．
（2）綠色熒光蛋白基因可以作為標記基因，用于鑒別和篩選蠶卵中是否含有人工絲蛋白基因．
（3）PCR技術的原理是DNA雙鏈復制；PCR反應體系的主要成分應該包含擴增緩沖液（含Mg²⁺）、水、4種脫氧核苷酸、模板DNA、Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶） 和一對引物．
（4）生物反應器培養(yǎng)家香細胞時會產(chǎn)生接觸抑制，所以培養(yǎng)時通常將多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反應器 中，這樣可以通過增大細胞貼壁生長的附著面積來增加培養(yǎng)的細胞數(shù)量，也有利于空氣交換．
故答案為：
（1）胰蛋白（或膠原蛋白）    顯微注射法
（2）標記基因
（3）DNA雙鏈復制      Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶）     引物
（4）增大細胞貼壁生長的附著面積

點評 本題考查基因工程和細胞工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)；識記動物細胞培養(yǎng)的過程及條件，能結合所學的知識準確答題．