Question

2012年諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理學(xué)獎(jiǎng)授予英國(guó)科學(xué)家約翰?戈登和日本科學(xué)家山中伸彌．約翰?戈登在20世紀(jì)60年代做過一個(gè)劃時(shí)代的實(shí)驗(yàn)：把美洲爪蟾的小腸上皮細(xì)胞核注入去核的卵細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)一部分卵依然可以發(fā)育成蝌蚪，其中的一部分蝌蚪可以繼續(xù)發(fā)育成為成熟的爪蟾．山中伸彌等科學(xué)家將四個(gè)關(guān)鍵基因轉(zhuǎn)入小鼠的成纖維細(xì)胞，使其變成多功能干細(xì)胞（iPS），這些干細(xì)胞可再轉(zhuǎn)化成老鼠體內(nèi)任何種類的細(xì)胞．回答下列問題：
（1）約翰?戈登之后，科學(xué)界利用該技術(shù)進(jìn)行更多細(xì)胞核轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)，復(fù)制出多種哺乳類動(dòng)物．在哺乳動(dòng)物的核轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)中，一般通過

 

（物理方法）將受體細(xì)胞激活，使其進(jìn)行細(xì)胞分裂和發(fā)育，當(dāng)胚胎發(fā)育到

 

階段時(shí)，將胚胎移入受體（代孕）動(dòng)物體內(nèi)．
（2）從卵巢中吸取的卵母細(xì)胞，一般要培養(yǎng)到

 

階段才能用于實(shí)驗(yàn)．
（3）利用體細(xì)胞進(jìn)行核移植技術(shù)的難度明顯高于胚胎細(xì)胞核移植的原因是

 

．
（4）在山中伸彌的實(shí)驗(yàn)中，利用了逆轉(zhuǎn)錄病毒，該病毒的作用是

 

．
（5）一般情況下，體外擴(kuò)增目的基因常用的方法是

 

．在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到細(xì)胞表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止分裂增值，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的

 

．要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來(lái)，需要用

 

處理．

Answer 1

考點(diǎn)：胚胎移植,PCR技術(shù)的基本操作和應(yīng)用,基因工程的原理及技術(shù),動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)過程

專題：

分析：細(xì)胞分化程度越高，全能性越低；由于動(dòng)物體細(xì)胞全能性受限制，因而因此利用體細(xì)胞進(jìn)行核移植技術(shù)的難度明顯高于胚胎細(xì)胞核移植．
外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞得通過構(gòu)建基因表達(dá)的載體來(lái)實(shí)現(xiàn)．構(gòu)建基因表達(dá)的載體除了目的基因外還需要載體、工具酶．載體種類包括：質(zhì)粒、動(dòng)植物病毒、噬菌體．

解答： 解：（1）在哺乳動(dòng)物的核轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)中，一般通過電脈沖（或電刺激）將受體細(xì)胞激活，使其進(jìn)行細(xì)胞分裂和發(fā)育，當(dāng)胚胎發(fā)育到桑葚胚或囊胚階段時(shí)，將胚胎移入受體（代孕）動(dòng)物體內(nèi)．
（2）從卵巢中吸取的卵母細(xì)胞，一般要培養(yǎng)到MⅡ中期（減數(shù)分裂第二次分裂中期）階段才能用于實(shí)驗(yàn)．
（3）動(dòng)物細(xì)胞分化程度高，不容易恢復(fù)全能性，因此利用體細(xì)胞進(jìn)行核移植技術(shù)的難度明顯高于胚胎細(xì)胞核移植．
（4）在山中伸彌的實(shí)驗(yàn)中，利用了逆轉(zhuǎn)錄病毒，該病毒的作用是目的基因的載體．
（5）一般情況下，體外擴(kuò)增目的基因常用的方法是PCR技術(shù)（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）．在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到細(xì)胞表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞會(huì)停止分裂增值，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制．要使貼壁的細(xì)胞從瓶壁上分離下來(lái)，需要用胰蛋白處理．
故答案為：
（1）電脈沖（或電刺激）  桑葚胚或囊胚
（2）MⅡ中期（減數(shù)分裂第二次分裂中期）
（3）動(dòng)物細(xì)胞分化程度高，不容易恢復(fù)全能性
（4）目的基因的載體
（5）PCR技術(shù)（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）  接觸抑制   胰蛋白

點(diǎn)評(píng)：本題考查了基因工程、細(xì)胞工程和胚胎工程等方面的知識(shí)，意在考查考生的識(shí)記能力，難度適中．考生要能夠識(shí)記胚胎移植所選用的早期胚胎；識(shí)記卵母細(xì)胞的準(zhǔn)備時(shí)期；識(shí)記目的基因擴(kuò)增的方法等．