Question

【題目】B淋巴細(xì)胞瘤是一種惡性腫瘤，用常規(guī)手段治療時(shí)，會(huì)損傷大量的正常組織細(xì)胞，因此探索高效的治療手段已成為腫瘤治療領(lǐng)域需要迫切解決的熱點(diǎn)問(wèn)題。

（1）B淋巴細(xì)胞瘤產(chǎn)生的根本原因____________。體內(nèi)一旦出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞，正常機(jī)體通過(guò)細(xì)胞免疫，發(fā)揮了免疫系統(tǒng)的____________功能，從而避免人體患病。但由于各種原因，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞表面抗原表達(dá)量____________,無(wú)法被免疫系統(tǒng)識(shí)別，從而成功躲避攻擊，得以快速增殖。

（2）實(shí)驗(yàn)證實(shí)，CD19是B淋巴細(xì)胞瘤中特異性表達(dá)的一種抗原，在少數(shù)正常細(xì)胞，如B細(xì)胞、漿細(xì)胞中也有少量表達(dá)；CD28、CD137可激活T細(xì)胞，使其恢復(fù)增殖和抗腫瘤能力�？蒲腥藛T利用了在_________技術(shù)發(fā)展起來(lái)的雜交瘤技術(shù)獲得的CD19單克隆抗體，進(jìn)而與CD28、CD137組成嵌合抗原受體（CAR),其結(jié)構(gòu)如下圖所示。請(qǐng)預(yù)測(cè)CAR在免疫應(yīng)答中的優(yōu)勢(shì)：_________________。

（3）利用__________酶將控制CD19單抗、CD28、CD137等合成的相關(guān)基因構(gòu)建成嵌合基因，然后將嵌合基因與作為___________的修飾過(guò)的病毒結(jié)合，導(dǎo)入到T細(xì)胞并整合到__________上，檢測(cè)到目的（嵌合）基因表達(dá)后，培養(yǎng)獲得了大量的含嵌合抗原受體的T細(xì)胞（CAR—T）。

（4）對(duì)CAR—T的抗腫瘤效果進(jìn)行檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)步驟	具體操作
第一步	取40只生理狀態(tài)基本相同的裸鼠（無(wú)胸腺），通過(guò)外科手術(shù)將體積相同的惡性B淋巴瘤組織埋在裸鼠的直腸處，并將上述裸鼠隨機(jī)均分為A、B、C、D四組。
第二步	A組：注射lmL磷酸鹽緩沖液（PBS)； B組：注射 ； C組：注射lmL含有T細(xì)胞（僅轉(zhuǎn)入空載體）的PBS； D組(實(shí)驗(yàn)組）：注射 。
第三步	每5天測(cè)量腫瘤體枳，共觀測(cè)30天，對(duì)觀察結(jié)果進(jìn)行ki錄。

①選取裸鼠的原因是_______________________。

②B組注射___________________，D組注射_____________________。

③通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀測(cè)，證實(shí)了CAR-T細(xì)胞對(duì)小鼠體內(nèi)的腫瘤生長(zhǎng)有明顯抑制作用，那么試推測(cè)相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是怎樣的？_______________________________。

（5）你認(rèn)為將CAR-T用于人類(lèi)腫瘤治療，可能存在的風(fēng)險(xiǎn)是______________________。

Answer 1

【答案】 原癌基因與抑癌基因突變 監(jiān)控和清除 減少 動(dòng)物細(xì)胞融合 既可識(shí)別并結(jié)合腫瘤抗原又能激活T細(xì)胞，使其具有増殖和抗腫瘤能力 DNA連接 運(yùn)載體 細(xì)胞核中的DNA(染色體DNA) 裸鼠無(wú)胸腺，缺少T細(xì)胞，避免排異反應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)干擾；避免自身T細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞 1mL含有正常T細(xì)胞的PBS 1mL含有CAR-T的PBS D組腫瘤體積明顯小于A、B、C組（或腫瘤體積D<C≈B<A) CAR-T對(duì)某些正常組織（B細(xì)胞或漿細(xì)胞）表達(dá)的抗原進(jìn)行免疫應(yīng)答、載體插入到正常基因組中引起變異

【解析】試題分析：從圖中可見(jiàn)，A區(qū)含CD19單抗，可特異性結(jié)合B淋巴細(xì)胞瘤表面的抗原CD19，B區(qū)含CD28、CD137，可激活T細(xì)胞，所以該嵌合體抗原受體CAR的優(yōu)勢(shì)是既能通過(guò)結(jié)合CD19特異性識(shí)別B淋巴細(xì)胞瘤，又能激活T細(xì)胞產(chǎn)生效應(yīng)T細(xì)胞，增強(qiáng)了效應(yīng)T細(xì)胞定向殺傷B淋巴細(xì)胞瘤的能力。

（1）細(xì)胞癌變是原癌基因和抑癌基因發(fā)生突變導(dǎo)致的，體內(nèi)一旦出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞，正常機(jī)體通過(guò)細(xì)胞免疫，發(fā)揮了免疫系統(tǒng)監(jiān)控和清除的功能，從而避免人體患病。效應(yīng)T細(xì)胞無(wú)法識(shí)別腫瘤細(xì)胞，說(shuō)明腫瘤細(xì)胞膜表面抗原減少，無(wú)法被免疫系統(tǒng)識(shí)別，從而成功躲避攻擊，得以快速增殖。
（2）在制備單克隆抗體時(shí)，通常需要使用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)。從圖中可見(jiàn)，A區(qū)含CD19單抗，可特異性結(jié)合B淋巴細(xì)胞瘤表面的抗原CD19，B區(qū)含CD28、CD137，可激活T細(xì)胞，所以該嵌合體抗原受體CAR的優(yōu)勢(shì)是既能通過(guò)結(jié)合CD19特異性識(shí)別B淋巴細(xì)胞瘤，又能激活T細(xì)胞產(chǎn)生效應(yīng)T細(xì)胞，增強(qiáng)了效應(yīng)T細(xì)胞定向殺傷B淋巴細(xì)胞瘤的能力。
（3）構(gòu)建嵌合基因需要將CD19單抗基因和CD28基因、CD137基因整合在一起，所以需要限制酶切割，又需要DNA連接酶連接。目的基因?qū)�入到受體細(xì)胞時(shí)需要運(yùn)載體，此處選擇的運(yùn)載體是動(dòng)物病毒。由于目的基因?qū)�入后需要能在受體細(xì)胞穩(wěn)定存在并表達(dá)，所以需要讓目的基因整合到細(xì)胞本身的染色體DNA上。
（4）①由于要檢測(cè)CAR-T（嵌合抗原受體T細(xì)胞）的效果，最好沒(méi)有其他T細(xì)胞的干擾，而裸鼠體內(nèi)無(wú)胸腺，不能產(chǎn)生T細(xì)胞，能避免排異反應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)干擾，所以選取裸鼠的原因就是為了排除鼠自身T細(xì)胞對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
②由于要檢測(cè)CAR-T的效果，D組（實(shí)驗(yàn)組）中就應(yīng)注射等量含CAR-T的PBS。實(shí)驗(yàn)中C組的T細(xì)胞中轉(zhuǎn)入了空載體，D組T細(xì)胞中轉(zhuǎn)入了連有嵌合基因的載體，那么在邏輯上要確認(rèn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果是由嵌合基因表達(dá)產(chǎn)物造成的，還需要排除導(dǎo)入載體的過(guò)程對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，所以B組就應(yīng)該注射等量的未轉(zhuǎn)入載體的正常T細(xì)胞的PBS。
③要得到“CAR-T對(duì)小鼠體內(nèi)的腫瘤生長(zhǎng)有明顯抑制作用”的結(jié)論，那么預(yù)期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果就是D組裸鼠的腫瘤體積最小。
（5）由于CD19抗原在少數(shù)正常細(xì)胞，如B細(xì)胞、漿細(xì)胞中也有少量表達(dá)，所以在使用CAR-T治療時(shí)，也有可能殺傷正常B細(xì)胞、漿細(xì)胞，導(dǎo)致體液免疫能力減弱；也可能載體插入到正常基因組中引起變異。