Question

研究人員為了制備煙草（四倍體，4n=48）的葉片細(xì)胞與紫羅蘭（二倍體，2n=14）的紫色花瓣細(xì)胞的原生質(zhì)體，并誘導(dǎo)其融合形成紫羅蘭煙草植株，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：
一、原生質(zhì)體的制備酶解法制備原生質(zhì)體的原理是利用酶溶液對(duì)細(xì)胞壁成分的降解作用．蝸牛酶液從蝸牛（以植物為食）消化腺中提��；果膠酶、纖維素酶從微生物中提�。疄榱搜芯坎煌�酶液的酶解效果，某實(shí)驗(yàn)小組取無(wú)菌煙草幼葉，切成相同大小的小片，等量放入6支試管中，試劑用量和實(shí)驗(yàn)結(jié)果列于下表．請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題．

試管編號(hào) 項(xiàng)目	Ⅰ	Ⅱ	Ⅲ	Ⅳ	V	Ⅵ
蒸餾水（mL）	2	0	1	1	1	1
緩沖液（mL）	0	2	1	0.5	0.5	0.5
果膠酶液（mL）	0	0	0	0.5	0	0
蝸牛酶液（mL）	0	0	0	0	0.5	0
纖維素酶液（mL）	0	0	0	0	0	0.5
實(shí)驗(yàn)結(jié)果（綠色深淺程度）	-	-	-	+++	++++	++

（注：“+”越多表示綠色越深，“-”表示顏色無(wú)顯著變化）
（1）實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，需要輕搖試管，其目的是

 

，使原生質(zhì)體從葉小片中游離出來(lái)，以便觀察懸浮液綠色的深淺．
（2）從綠色的深淺可推測(cè)：蝸牛酶液酶解效果最好，原因是蝸牛酶液含有等多種酶．該實(shí)驗(yàn)中是空白對(duì)照組，其設(shè)置意義是

 

．
（3）如果對(duì)制取的煙草葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體是否還有活性進(jìn)行檢驗(yàn)，其檢驗(yàn)的方法可以是

 

．
二、用同樣方法制取紫羅蘭花瓣細(xì)胞原生質(zhì)體懸浮液
三、原生質(zhì)體融合
將等量的紫羅蘭花瓣細(xì)胞原生質(zhì)體懸浮液與煙草葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體懸浮液加入到裝有20%的PEG溶液的離心管中混合后，離心10min，將分離得到的融合成團(tuán)的原生質(zhì)體懸浮液與含有瓊脂的液體培養(yǎng)基混合均勻后，凝固形成很薄的平板．再利用有關(guān)顯微鏡觀察、鑒定融合的原生質(zhì)體．請(qǐng)分析：
（4）步驟三中，若所有的原生質(zhì)體均兩兩融合，則所得到的某一個(gè)融合的原生質(zhì)體中含有的染色體數(shù)可能是

 

．
（5）只利用顯微鏡觀察，不借助其他手段

 

（能，不能）鑒別出雜種融合的原生質(zhì)體，你所依據(jù)的觀察現(xiàn)象是

 

．
四、制取紫羅蘭煙草的人工種子
（6）如圖2中，包埋形成人工種子過(guò)程中，先適當(dāng)加熱使海藻酸鈉溶化，然后將溶化的海藻酸鈉溶液，再加入

 

充分?jǐn)嚢杌旌暇鶆颍�若將得到的人工種子播種后成長(zhǎng)為成紫羅蘭煙草植株，雜種植株為

 

倍體．

Answer 1

考點(diǎn)：植物體細(xì)胞雜交的過(guò)程

專(zhuān)題：

分析：本題綜合考查原生質(zhì)體的制備方法．
原生質(zhì)體是植物細(xì)胞去除細(xì)胞壁后的結(jié)構(gòu)，而去除細(xì)胞壁需用相應(yīng)的酶（纖維素酶和果膠酶）進(jìn)行處理．
據(jù)圖1、圖2分析，葉組織塊脫分化形成愈傷組織，再分化形成胚狀體，用海藻酸鈉進(jìn)行包埋形成人工種子，其中將剛生產(chǎn)的人工種子浸泡在氯化鈣溶液中一段時(shí)間，使人工種子形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)．

解答： 解：（1）實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，需要輕搖試管，以使細(xì)胞壁與酶充分接觸，提高酶解效果．
（2）蝸牛以植物為食，所以唾液中含有果膠酶和纖維素酶，I、Ⅱ、Ⅲ沒(méi)有添加酶溶液為空白對(duì)照組．其目的是排除無(wú)關(guān)變量的干擾．
（3）用低滲漲破法來(lái)檢驗(yàn)原生質(zhì)體是否符合要求，若沒(méi)有細(xì)胞壁則可以漲破，有則不能漲破．
4）步驟三中，若所有的原生質(zhì)體均兩兩融合，則會(huì)形成3種細(xì)胞，即紫羅蘭細(xì)胞自身融合的細(xì)胞、煙草葉肉細(xì)胞自身融合的細(xì)胞，雜種細(xì)胞，所以融合后的細(xì)胞中染色體數(shù)目為28條或96條或62條．
（5）只利用顯微鏡觀察，不借助其他手段也能鑒別出雜種融合的原生質(zhì)體，所依據(jù)的觀察現(xiàn)象是原生質(zhì)體中既有葉綠體，又有紅色液泡．
（6）圖2中，包埋形成人工種子過(guò)程中，先適當(dāng)加熱使海藻酸鈉溶化，然后將溶化的海藻酸鈉溶液，再加入胚狀體充分?jǐn)嚢杌旌暇鶆颍�若將得到的人工種子播種后成長(zhǎng)為成紫羅蘭煙草植株，雜種植株為六倍體．
故答案為：
（1）為了使細(xì)胞壁與酶充分接觸，提高酶解效果
（2）果膠酶和纖維素酶；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ；排除無(wú)關(guān)變量的干擾
（3）放入低濃度溶液（或清水）中，看是否被漲破．
（4）28，或62或96
（5）能；原生質(zhì)體中既有葉綠體，又有紅色液泡
（6）胚狀體；六

點(diǎn)評(píng)：本題以圖表為載體，考查學(xué)生獲取和處理信息的能力，分析和解決問(wèn)題的能力．實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可以變化的因素稱(chēng)為變量．其中人為改變的變量稱(chēng)做自變量，隨著自變量的變化而變化的變量稱(chēng)做因變量．除自變量外，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能還會(huì)存在一些可變因素，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響，這些變量稱(chēng)為無(wú)關(guān)變量．要注意無(wú)關(guān)變量應(yīng)該相同且適宜．