Question

【題目】白細(xì)胞介素是一類(lèi)淋巴因子。研究人員將人白細(xì)胞介素的基因?qū)�入到酵母�?xì)胞中，使其分泌出有活性的白細(xì)胞介素。

（1）為增加白細(xì)胞介素基因的數(shù)量，可使用_____________________技術(shù)，但前提是必須知道基因的已知序列，目的是__________________________________________。

（2）在重組載體導(dǎo)入酵母菌細(xì)胞之前，需用_____________________處理酵母菌，白細(xì)胞介素基因進(jìn)入酵母菌細(xì)胞內(nèi)，并且在其細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程，稱(chēng)為_____________________。在表達(dá)過(guò)程中，啟動(dòng)子需與_____________________識(shí)別和結(jié)合，從而驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程。

（3）在體液免疫過(guò)程中，白細(xì)胞介素是由_____________________細(xì)胞分泌的，為了能成功表達(dá)出白細(xì)胞介素，不使用細(xì)菌，而使用酵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞，可能原因是_____________________。

（4）在分泌型表達(dá)載體和白細(xì)胞介素基因所在的DNA分子上均有多個(gè)限制酶的酶切位點(diǎn)，圖示過(guò)程獲得有效表達(dá)的重組栽體使用了EcoRl和EcoR52兩種限制酶，比使用單一的限制酶，其優(yōu)點(diǎn)是__________________________________________。

Answer 1

【答案】PCR 設(shè)計(jì)引物 Ca2+ 轉(zhuǎn)化 RNA聚合酶 T淋巴 細(xì)菌細(xì)胞中無(wú)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等加工白細(xì)胞介素的細(xì)胞器 防止目的基因、表達(dá)載體發(fā)生自身環(huán)化或者防止目的基因反向接入到分泌型表達(dá)載體中

【解析】

分析題圖，圖示表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，載體和目的基因都有限制酶EcoRⅠ與EcoR52的切割位點(diǎn)，所以切割載體和目的基因時(shí)用限制酶EcoRⅠ與EcoR52，再用DNA連接酶連接目的基因和運(yùn)載體形成重組載體。

（1）基因工程中，擴(kuò)增目的基因的方法為PCR技術(shù)，但前提是必須知道基因的已知序列，以便設(shè)計(jì)引物。

（2）在重組載體導(dǎo)入酵母菌細(xì)胞之前，需用Ca2+處理酵母菌，使酵母菌稱(chēng)為感受態(tài)細(xì)胞，白細(xì)胞介素基因進(jìn)入酵母菌細(xì)胞內(nèi)，并且在其細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程，稱(chēng)為轉(zhuǎn)化．在表達(dá)過(guò)程中，啟動(dòng)子需與RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合，從而驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄過(guò)程。

（3）在體液免疫過(guò)程中，白細(xì)胞介素是由T淋巴細(xì)胞分泌的；由于細(xì)菌屬于原核生物，細(xì)胞中無(wú)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等加工白細(xì)胞介素的細(xì)胞器，因此為了能成功表達(dá)出白細(xì)胞介素，不使用細(xì)菌，而使用酵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞。

（4）在分泌型表達(dá)載體和白細(xì)胞介素基因所在的DNA分子上均有多個(gè)限制酶的酶切位點(diǎn)，圖示過(guò)程獲得有效表達(dá)的重組栽體使用了EcoRl和EcoR52兩種限制酶，比使用單一的限制酶，其優(yōu)點(diǎn)是防止目的基因、表達(dá)載體發(fā)生自身環(huán)化或者防止目的基因反向接入到分泌型表達(dá)載體中。