Question

在培育轉(zhuǎn)基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作為標(biāo)記基因，只有含卡那霉素抗性基因的細(xì)胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長(zhǎng)．如圖為獲得抗蟲(chóng)棉的技術(shù)流程．請(qǐng)據(jù)圖回答：
（1）基因工程的基本操作程序主要包括四個(gè)步驟：目的基因的獲取、

 

、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、

 

．
（2）A過(guò)程需要的酶有

 

和

 

．
（3）要把重組質(zhì)粒導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌，首先必須用

 

處理土壤農(nóng)桿菌，使土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)變?yōu)?div id="ddlr3mm" class='quizPutTag' contenteditable='true'> 

態(tài)；然后將在緩沖液中混合培養(yǎng)完成轉(zhuǎn)化過(guò)程．
（4）含有重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌侵染離體棉花葉片組織后，將離體棉花葉片組織培養(yǎng)成再生植株要經(jīng)過(guò)[C]

 

和[E]

 

．如要確保再生植株中含有抗蟲(chóng)基因，可在C過(guò)程的培養(yǎng)基中加入

 

．
（5）目的基因能否在棉花植株體內(nèi)維持和表達(dá)其遺傳特性的關(guān)鍵是

 

．這需要通過(guò)檢測(cè)才能知道，檢測(cè)采用的方法是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),植物培養(yǎng)的條件及過(guò)程

專題：

分析：分析圖解：圖中A表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，B表示篩選含有重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌，C表示脫分化，D表示愈傷組織，E表示再分化．
基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲��；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與鑒定．
農(nóng)桿菌特點(diǎn)：易感染雙子葉植物和裸子植物，對(duì)單子葉植物沒(méi)有感染力；Ti質(zhì)粒的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的染色體上．
轉(zhuǎn)化：目的基因插人Ti質(zhì)粒的T-DNA上 農(nóng)桿菌→導(dǎo)入植物細(xì)胞→目的基因整合到植物細(xì)胞染色體上→目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)．

解答： 解：（1）基因工程的基本操作程序主要包括四個(gè)步驟：目的基因的獲取、基因表達(dá)載體構(gòu)建、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與鑒定．
（2）基因表達(dá)載體構(gòu)建過(guò)程需要限制酶和DNA連接酶．
（3）要把重組質(zhì)粒導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌，首先必須用Ca²⁺感受處理土壤農(nóng)桿菌，使土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)變?yōu)橹亟M質(zhì)粒和感受細(xì)胞態(tài)；然后將在緩沖液中混合培養(yǎng)完成轉(zhuǎn)化過(guò)程．
（4）含有重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌侵染離體棉花葉片組織后，離體棉花葉片組織必須通過(guò)植物的組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)成再生植株，該過(guò)程需要要經(jīng)過(guò)[C]脫分化和[E]再分化．如要確保再生植株中含有抗蟲(chóng)基因，可在C脫分化過(guò)程的培養(yǎng)基中加入卡那霉素，進(jìn)行篩選．
（5）目的基因能否在棉花植株體內(nèi)維持和表達(dá)其遺傳特性的關(guān)鍵是目的基因是否插入受體細(xì)胞的DNA分子上．這需要通過(guò)檢測(cè)才能知道，檢測(cè)采用的方法是DNA分子雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）基因表達(dá)載體構(gòu)建  目的基因的檢測(cè)與鑒定
（2）限制酶     DNA連接酶 
（3）Ca²⁺感受  重組質(zhì)粒和感受細(xì)胞
（4）脫分化  再分化 卡那霉素 
（5）目的基因是否插入受體細(xì)胞的DNA分子上      DNA分子雜交技術(shù)

點(diǎn)評(píng)：本題考查了基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記基因工程的操作步驟以及操作工具；明確農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法在植物基因工程中的應(yīng)用；并能夠掌握植物組織培養(yǎng)技術(shù)的過(guò)程等知識(shí)．