Question

15．為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉運肽基因相連，導入油菜細胞并獲得了轉基因油菜品種．請回答下列問題：
（1）研究人員從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，并用同樣的方法獲取轉運肽基因．依據基因的已知序列設計引物，然后采用PCR技術分別進行擴增．
（2）如圖所示，選用圖中的ClaⅠ酶處理兩個基因后，再用DNA連接酶處理，可得到AD端（填圖中字母）相連的融合基因．

（3）將上述融合基因插入圖所示Ti質粒的T-DNA中，構建基因表達載體（或“重組質�！保┎�導入農桿菌中．將獲得的農桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到含融合基因的單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉化的侵染液．
（4）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞，進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞，該細胞通過植物組織培養(yǎng)技術，可培育成轉基因油菜植株．
（5）用抗原-抗體雜交法可檢測轉基因油菜植株中的融合基因是否成功表達．

Answer 1

分析 1、基因文庫包括cDNA文庫、基因組文庫等．某個群體包含一種生物所有的基因的文庫叫基因組文庫，而用某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA反轉錄產生的多種互補DNA片段屬于cDNA文庫．
2、限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性．同種限制酶切割能夠產生相同的黏性末端，便于質粒和目的基因連接．

解答 解：（1）獲取目的基因的方法包括：①從基因文庫中獲取；②利用PCR技術擴增； ③人工合成（化學合成）．因此，可以從基因文庫中獲取酶D基因和轉運肽基因；擴增目的基因可采用PCR技術．
（2）切割獲得酶D基因和轉基因肽基因時，應該用同種限制酶，以獲得相應的黏性末端．因此，可用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到A、D端相連的融合基因．
（3）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質粒的T-DNA中，構建表達載體并導入農桿菌中．由圖可知，標記基因是四環(huán)素抗性基因，因此將獲得的農桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落．
（4）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞．
（4）檢測目的基因是否成功表達，應該采用抗原-抗體雜交法．
故答案為：
（1）基因文庫    PCR技術  
（2）ClaⅠA   D
（2）基因表達載體（或“重組質�！保�      四環(huán)素
（3）利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞
（4）成功表達

點評 本題以增加油菜種子的含油量為材料背景，考查基因工程的相關知識，要求考生能夠掌握目的基因獲取的方法，能夠結合圖解中限制酶切點選擇合成的工具酶獲得融合基因，同時掌握目的基因導入受體細胞以及目的基因檢測與鑒定的方法等．