Question

【題目】某生物興趣小組進(jìn)行有關(guān)血紅蛋白提取和分離實(shí)驗(yàn)以及以a-淀粉酶為材料的實(shí)驗(yàn)，回答下列問題：

（1）提取血紅蛋白宜選用哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞為材料，原因是_____________。

（2）血紅蛋白提取和分離般分為四步，即樣品處理、_______、純化和純度鑒定。樣品處理過程中共有___次離心。純度鑒定方法中使用最多的是____________。

（3）血紅蛋白分離過程中如果有氣泡產(chǎn)生，則主要與下列哪項(xiàng)有關(guān)___ ( 填序號(hào))。

①凝膠色譜柱的制作 ②色譜柱的裝填 ③樣品的處理

（4）使用凝膠色譜法分離a-淀粉酶、血紅蛋白兩種蛋白質(zhì)，凝膠色譜法是根據(jù)____________分離蛋白質(zhì)的有效方法。實(shí)驗(yàn)步驟：將含有a-淀粉酶、血紅蛋白兩種蛋白質(zhì)的混合物加人裝填了凝膠的玻璃管上端，用__________進(jìn)行洗脫，檢測(cè)其洗脫先后次序。

（5）該小組同學(xué)用瓊脂作載體，用包埋法固定a-淀粉酶來探究固定化酶的催化效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：（注：假設(shè)加入試管中的固定化淀粉酶量與普通a-淀粉酶量相同)

	1號(hào)試管	2號(hào)試管
固定化淀粉酶	√
普通α-淀粉酶		√
淀粉溶液	√	√
60℃保溫5分鐘，取出冷卻至室溫，滴加碘液
現(xiàn)象	變藍(lán)	不變藍(lán)

1號(hào)試管變藍(lán)的原因是_____________________。

Answer 1

【答案】哺乳動(dòng)物的成熟紅細(xì)胞沒有細(xì)胞核和眾多的細(xì)胞器 粗分離 2（2-5都可以） SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳 ② 相對(duì)分子質(zhì)量不同 磷酸緩沖溶液 淀粉是生物大分子，難以通過擴(kuò)散與淀粉酶接觸而導(dǎo)致反應(yīng)無法進(jìn)行

【解析】

血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定；首先通過洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液，即樣品的處理；再經(jīng)過透析去除分子量較小的雜質(zhì)，即樣品的粗分離；然后通過凝膠色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去，即樣品的純化；最后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。

（1）哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞沒有沒有細(xì)胞核和眾多的細(xì)胞器，所以更好的獲得血紅蛋白。

（2）血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定；在樣品處理中，紅細(xì)胞的洗滌需要低速短時(shí)間離心3次，在分離血紅蛋白過程中需要2000r/min離心10min，所以一共需要4次離心。純度鑒定方法使用最多的是SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。

（3）如果有氣泡，可能是在裝填凝膠色譜柱時(shí)不緊密導(dǎo)致。②正確。

（4）凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。在洗脫是用磷酸緩沖溶液。

（5）1號(hào)試管使用了固定化酶技術(shù)，所以變藍(lán)的原因是淀粉是生物大分子，難以通過擴(kuò)散與淀粉酶接觸而導(dǎo)致反應(yīng)無法進(jìn)行。