Question

【題目】自然界中的微生物往往是混雜生長的。人們在研究微生物時一般要將它們分離提純，然后進(jìn)行數(shù)量的測定。下面是有關(guān)土壤中分解尿素的細(xì)菌分離和計數(shù)的實驗過程，請回答有關(guān)問題。

（1）為分離出土壤中分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)該用_______________________的培養(yǎng)基進(jìn)行分離，這種培養(yǎng)基屬于______培養(yǎng)基（按功能分類）。可在培養(yǎng)基中加入_________指示劑對該類微生物鑒別。

（2）若取土樣6g，應(yīng)加入_______mL的無菌水配制成稀釋10倍土壤溶液。因土壤中細(xì)菌密度很大，需要不斷加以稀釋，配制成101～107不同濃度的土壤溶液。將103～107倍的稀釋液分別吸取0.2mL加入到固體培養(yǎng)基上，用涂布器將菌液鋪平，每個稀釋度下至少涂布3個平板，這種接種方法稱為_______________。將接種的培養(yǎng)皿放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h～48h，觀察并統(tǒng)計菌落數(shù)，結(jié)果如下表，其中_______倍的稀釋比較合適，由此計算出每克土壤中的菌落數(shù)為__________ 。這種方法測定的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目_______（低/高）。

稀釋倍數(shù)		103	104	105	106	107
菌落數(shù) （個）	1號平板	478	367	277	26	5
	2號平板	496	354	261	20	8
	3號平板	509	332	254	29	3

（3）若研究尿素分解菌的群體生長規(guī)律，可采用平板劃線法分離土壤中的尿素分解菌。操作時，接種環(huán)通過灼燒滅菌，在第二次及以后劃線時，總是從上一次的末端開始劃線。這樣做的目的是_______________________。將分離純化后的單個菌落進(jìn)行液體培養(yǎng)，可采用定期取樣的方法進(jìn)行計數(shù)。若以一個大方格（體積為0.1mm3）有25個中方格的計數(shù)板為例進(jìn)行計算，設(shè)五個中方格中總菌數(shù)為45，菌液稀釋倍數(shù)為102 ，那么原菌液的菌群密度為________個/mL。

Answer 1

【答案】尿素作為唯一的氮源 選擇培養(yǎng)基 酚紅 54 稀釋涂布平板法 105 2.2×107 低 將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得（不連續(xù)）單個菌落 2.25×108

【解析】

本題是考查土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)的知識，篩選尿素分解菌需要使用尿素為唯一的氮源的選擇培養(yǎng)基，尿素分解菌可以使用酚紅指示劑進(jìn)行鑒定；稀釋涂布平板法接種可以用來進(jìn)行微生物的計數(shù)。

（1）分解尿素的細(xì)菌，其氮源是尿素，而其他微生物的氮源是有機(jī)氮，所以欲分離分解尿素的細(xì)菌，應(yīng)用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行分離，并加入酚紅指示劑進(jìn)行鑒別。

（2）根據(jù)題意分析，需要稀釋10倍的土壤溶液，因此應(yīng)該將6g土樣加入到54mL的無菌水進(jìn)行配制；將103-107倍的稀釋液分別吸取0.2mL加入到固體培養(yǎng)基上，用稀釋涂布平板法將菌液用涂布器涂布到固體培養(yǎng)基上；估算樣品中的活菌數(shù)時，往往選取菌落數(shù)在30 到300之間的平板，分析表格是數(shù)據(jù)可知，105的稀釋度平板菌落數(shù)在這一范圍；每克土壤中的菌落數(shù)為（277+261+254）÷3×105÷0.2÷6=2.2×107。稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物計數(shù)時，由于菌落之間會相互重疊，因此測定的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低。

（3）用平板劃線法分離土壤中的尿素分解菌時，為了將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得（不連續(xù)）單個菌落，在第二次及以后劃線時，總是從上一次的末端開始劃線。若以一個大方格（體積為0.1mm3）有25個中方格的計數(shù)板為例進(jìn)行計算，設(shè)五個中方格中總菌數(shù)為45，菌液稀釋倍數(shù)為102 ，那么原菌液的菌群密度=45×5÷0.1÷10-3×102=2.25×108個/mL。