Question

【題目】鴯鹋油提取自澳洲動物鴯鹋（一種當?shù)爻Ｒ婙B類）的背部脂肪，具有很多用途，如促進傷口愈合，緩解關(guān)節(jié)炎等，也常與一些抗菌成分混合制成抗菌藥物，近年來受到研究人員的關(guān)注。

（1）隨著抗菌藥物被廣泛使用，病原菌的抗藥性基因頻率發(fā)生___________（填“定向”或“不定向”）改變，人們迫切希望發(fā)現(xiàn)新結(jié)構(gòu)的抗菌化合物。

（2）前期研究發(fā)現(xiàn)鴯鹋油的水溶性較差，所以不能在___________培養(yǎng)基上出現(xiàn)清晰的抑菌圈，故將醇鵲油與乙醇和Tween 80（一種乳化劑）混合均勻制成乳液。為確定鴯鹋油的最小抑菌濃度（MIC），研究人員進行了以下實驗：

①將大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌分別___________到LB培養(yǎng)基中，在37℃搖床條件下培養(yǎng)。搖床振蕩培養(yǎng)的原因是___________。

②一段時間后將上述培養(yǎng)基稀釋為一定濃度的菌懸液，加入不同稀釋濃度的鴯鹋油乳液并振蕩混勻，培養(yǎng)20 h后測定菌體的存活狀況，結(jié)果如下表。

鴯鹋油濃度/%	菌體生長情況
	大腸桿菌	金黃色葡萄球菌	沙門氏菌
0	+	+	+
0．00156	+	+	+
0．00313	+	+	+
0．00625	-	+	+
0．0125	-	-	+
0．025	-	-	+
0．05	-	-	+

注：“+”表示有菌生長；“-”表示無菌生長。

上述結(jié)果顯示：_______________。

（3）常見抗菌藥物霉素的抗菌機理是抑制細菌細胞壁的合成。有人提出鴯鹋油可增大菌體細胞膜的通透性。已知多數(shù)細菌體內(nèi)存在β—半乳糖苷酶，可催化乳糖水解生成_________________和半乳糖，鄰硝基酚-β半乳糖苷（ONPG）是一種乳糖類似物，可進入菌體，被β-半乳糖苷酶水解為鄰硝基苯酚（一種黃色物質(zhì)）。分光光度計可定量檢測溶液中某種物質(zhì)的含量。為確定鵲油能否增大菌體細胞膜通透性，請你根據(jù)上述原理寫出實驗思路____________。

Answer 1

【答案】定向 固體 接種 供氧、目的菌與營養(yǎng)物質(zhì)充分接觸 大腸桿菌對鴯鹋油較為敏感，最小抑菌濃度約為 0．00625%，對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度約為 0．0125%，并且鴯鹋油對沙門氏菌沒有表現(xiàn)出抑菌性 葡萄糖 將大腸桿菌（或其他細菌）置于培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間，再加入ONPG 和一定濃度（≥MIC）的鴯鹋油，對照組不加鴯鹋油。一段時間后利用分光光度計測量鄰硝基苯酚的量，記錄并比較。

【解析】

微生物的實驗室培養(yǎng)，常用到培養(yǎng)基，培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。抑菌圈法又叫擴散法，是利用待測藥物在瓊脂平板中擴散使其周圍的細菌生長受到抑制而形成透明圈，即抑菌圈，根據(jù)抑菌圈大小判定待測藥物抑菌效價的一種方法。

（1）隨著抗菌藥物被廣泛使用，抗藥性強的病原菌存活，病原菌的抗藥性基因頻率提高，發(fā)生定向改變。

（2）鴯鹋油的水溶性較差，所以不能在固體培養(yǎng)基上出現(xiàn)清晰的抑菌圈。

①將大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌分別接種到LB培養(yǎng)基中。搖床振蕩培養(yǎng)可以提高溶氧量、增加目的菌與營養(yǎng)物質(zhì)的接觸。

②從表中可知，不同稀釋濃度的鴯鹋油乳液中沙門氏菌均有生長，說明鴯鹋油對沙門氏菌沒有表現(xiàn)出抑菌性。0.00625濃度下，大腸桿菌停止生長，0.0125濃度下，金黃色葡萄球菌停止生長，說明大腸桿菌對鴯鹋油較為敏感，最小抑菌濃度約為 0.00625%，對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度約為 0.0125%。

（3）乳糖由一分子半乳糖和一分子葡萄糖組成。鄰硝基酚-β半乳糖苷（ONPG）是一種乳糖類似物，可進入菌體，被β-半乳糖苷酶水解為鄰硝基苯酚（一種黃色物質(zhì)）。分光光度計可定量檢測溶液中某種物質(zhì)的含量。為確定鵲油能否增大菌體細胞膜通透性，自變量是鵲油的有無，因變量是菌體細胞膜的通透性。觀測指標為鄰硝基苯酚的量。因此，實驗可設(shè)計為：將大腸桿菌（或其他細菌）置于培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間，再加入ONPG 和一定濃度（≥MIC）的鴯鹋油，對照組不加鴯鹋油。一段時間后利用分光光度計測量鄰硝基苯酚的量，記錄并比較。