Question

9．我國一科研團隊將小麥液泡膜Na⁺/K⁺逆向轉(zhuǎn)運蛋白基因（TaNHX2基因）轉(zhuǎn)移到水稻細(xì)胞內(nèi)，獲得了轉(zhuǎn)基因耐鹽水稻新品種．回答下列有關(guān)問題：
（1）TaNHX2基因通過控制蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)直接控制生物的耐鹽性狀．
（2）為檢測目的基因在水稻細(xì)胞中是否成功導(dǎo)入，運載體上應(yīng)含有特定的C．
A．復(fù)制原點    B．啟動子     C．標(biāo)記基因
（3）將導(dǎo)入目的基因的水稻幼胚接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進行脫分化，培養(yǎng)出愈傷組織，然后愈傷組織形成水稻植株．
（4）為驗證外源基因整合到水稻基因組后是否轉(zhuǎn)錄，可從轉(zhuǎn)基因植株的細(xì)胞中提取總mRNA（填“總mRNA”或“TaNHX2基因mRNA”）并反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再以反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，利用放射性標(biāo)記的TaNHX2基因單鏈作為引物，通過PCR技術(shù)進行基因擴增．若以根細(xì)胞為材料擴增結(jié)果為陽性（有產(chǎn)物生成），以葉細(xì)胞為材料擴增結(jié)果為陰性（無產(chǎn)物生成），則說明目的基因（TaNHX2基因）僅在根細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，未在葉細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄．
（5）將生長至4葉期的轉(zhuǎn)基因幼苗轉(zhuǎn)入高濃度的NaCl溶液中培養(yǎng)，進行耐鹽實驗，用非轉(zhuǎn)基因幼苗，進行耐鹽試驗作為對照．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）根據(jù)題干信息，TaNHX2基因為Na⁺/K⁺逆向轉(zhuǎn)運蛋白基因，由此可見，TaNHX2基因通過控制蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)直接控制生物的耐鹽性狀．
（2）為檢測目的基因在水稻細(xì)胞中是否成功導(dǎo)入，運載體上應(yīng)含有特定的標(biāo)記基因．
（3）在植物組織培養(yǎng)過程中，將外植體培養(yǎng)成愈傷組織的過程稱為脫分化．
（4）基因轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物為mRNA，為驗證外源基因整合到水稻基因組后是否轉(zhuǎn)錄，可從轉(zhuǎn)基因植株的細(xì)胞中提取總mRNA并反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再以反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，利用放射性標(biāo)記的TaNHX2基因單鏈作為引物，通過PCR技術(shù)進行基因擴增．若以根細(xì)胞為材料擴增結(jié)果為陽性（有產(chǎn)物生成），以葉細(xì)胞為材料擴增結(jié)果為陰性（無產(chǎn)物生成），則說明目的基因（TaNHX2基因）僅在根細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，未在葉細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄．
（5）將生長至4葉期的轉(zhuǎn)基因幼苗轉(zhuǎn)入高濃度的NaCl溶液中培養(yǎng)，進行耐鹽實驗，用非轉(zhuǎn)基因幼苗，進行耐鹽試驗作為對照．
故答案為：
（1）蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)
（2）C
（3）脫分化   
（4）總mRNA      PCR      目的基因（TaNHX2基因）僅在根細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，未在葉細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄
（5）非轉(zhuǎn)基因幼苗，進行耐鹽試驗

點評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的概念、原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．