Question

【題目】研究人員將抗鹽基因轉(zhuǎn)入普通煙草培育出抗鹽煙草，該過程所用的質(zhì)粒與含抗鹽基因的DNA上相關(guān)限制酶的酶切位點分別如圖1、圖2所示。限制性核酸內(nèi)切酶BamHI、BclⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ，它們識別的堿基序列和酶切位點分別為G↓GATCC、T↓GATCA、↓GATC、A↓AGCTT。圖3表示該過程中利用含目的基因的農(nóng)桿菌進(jìn)行轉(zhuǎn)化作用的示意圖。請回答下列問題。

（1）圖1質(zhì)粒中沒有標(biāo)注出來的基本結(jié)構(gòu)是 。

（2）用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建基因表達(dá)載體時，應(yīng)選用限制酶 切割質(zhì)粒，選用 限制酶切割含目的基因的DNA片段。限制酶切斷的是DNA分子中特定部位的兩個脫氧核苷酸之間的 鍵。

（3）將上述切開的質(zhì)粒與目的基因混合，加入DNA連接酶連接后，導(dǎo)入受體受體細(xì)胞，受體細(xì)胞的類型（對兩種抗生素表現(xiàn)出抗性R或敏感性S）包含 （不考慮基因突變）。

①XR、YR ②XR、YS ③XS、YR ④XS、YS

（4）將圖3過程 （填序號）中發(fā)生了基因重組，過程②、③所用的培養(yǎng)基中，通常要調(diào)控好 兩類激素的比例。

（5）從個體水平鑒定抗鹽轉(zhuǎn)基因煙草是否培育成功的方法是 。

Answer 1

【答案】（8分）（1）復(fù)制原點（2）BamHI Sau3AI（或BamHI、Sau3AI） 磷酸二酯

（3）①②④（4）①生長素和細(xì)胞分裂素

（5）用一定濃度鹽水澆灌轉(zhuǎn)基因幼苗或?qū)⑵湟圃缘禁}堿地中觀察其生長狀態(tài)

【解析】（1）圖中質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)中有啟動子、標(biāo)記基因、終止子，沒有復(fù)制原點。

（2）由于目的基因要表達(dá)的話，必須插入啟動子與終止子之間，所以不能用BclⅠ進(jìn)行切割。又因為BamHI、BclⅠ、Sau3AⅠ三種限制酶切割漏出來的粘性末端是相同的，所以應(yīng)該用BamHI切割質(zhì)粒，用BamHI、Sau3AI切割目的基因。限制酶切斷的是DNA分子中特定部位的兩個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。

（3）將上述切開的質(zhì)粒與目的基因混合，加入DNA連接酶連接后，導(dǎo)入受體受體細(xì)胞的可能有重組質(zhì)粒或質(zhì)粒，重組質(zhì)粒含有X抗生素抗性基因，所以受體細(xì)胞可能抗X而對Y敏感，②正確；也可能抗X和抗R，①正確；如果質(zhì)粒中經(jīng)過BamHI和Sau3AI切割后X被切掉的話，則重組質(zhì)粒不含兩種抗性基因，所以受體細(xì)胞可能兩種抗性都沒有，④正確。

（4）圖3中①過程通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，實現(xiàn)了不同生物的基因重新組合。過程②、③表示是植物組織培養(yǎng)過程，該過程中需要調(diào)控好生長素和細(xì)胞分裂素的比例。

（5）從個體水平鑒定抗鹽轉(zhuǎn)基因煙草是否培育成功的方法是用一定濃度鹽水澆灌轉(zhuǎn)基因幼苗或?qū)⑵湟圃缘禁}堿地中觀察其生長狀態(tài)。