Question

【題目】回答與微生物的培養(yǎng)、分離及應(yīng)用有關(guān)的問題：

(1)微生物相關(guān)實(shí)驗(yàn)常常要求進(jìn)行無菌操作，如在使用三角瓶時(shí)需依次用 ______________、牛皮紙封口后進(jìn)行滅菌，制備尿素固體培養(yǎng)基過程中采用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌法和 _____________________。

(2)采用如圖固定化裝置進(jìn)行葡萄糖發(fā)酵制酒精，圖中 a 是 ____________，該實(shí)驗(yàn)中其可以反復(fù)利用，實(shí)驗(yàn)過程一定要在____________、無氧且溫度和 pH 適宜等條件下進(jìn)行。在發(fā)酵過程中 葡萄糖濃度不能過高，否則 __。在使用較低濃度葡萄糖溶液過柱時(shí)，反應(yīng)柱流 出液中仍有葡萄糖， 其原因可能 是_________(答出 2 點(diǎn))。

(3)在果酒釀造過程中，如果果汁滅菌不嚴(yán)格，含有醋桿菌，酒精發(fā)酵旺盛時(shí)，醋桿菌不能將果汁中的糖發(fā)酵為酸的原因是 _______。為了測定酵母菌的活細(xì)胞密度，將待測菌液稀釋 1000 倍后， 經(jīng)等體積的染色劑溶液染色( 活細(xì)胞無色，死細(xì)胞藍(lán)色)，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)( 規(guī)格 2mmx2mx0.1mm，有 25 個中方格)，理論上計(jì)算 5個中方格的活細(xì)胞數(shù)不應(yīng)少于 __________________才能達(dá)到每毫升 3×109 個活細(xì)胞的預(yù)期密度。

(4)用比色計(jì)測定某種果醋中的葡萄糖含量，需要制作____的標(biāo)準(zhǔn)曲線。實(shí)驗(yàn)中一般不能更換比色杯，若制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的比色杯光程小于測定樣液的比色杯光程，測得的樣液中葡萄糖含量 ______ (填“偏大”、“偏小”或“無影響”)。

Answer 1

【答案】封口膜(或 6 層紗布) G6 玻璃砂漏斗過濾 固定化酵母 無菌 酵母菌會因失水過多而死亡 反應(yīng)柱中流速過快、固定化酵母細(xì) 胞數(shù)目較少 醋桿菌是好氧細(xì)菌，而果酒發(fā)酵為無氧環(huán)境，醋桿菌無法生存 120 葡萄糖濃度與光密度值關(guān)系 偏大

【解析】

分析題圖：圖示為固定化酵母的反應(yīng)柱示意圖，圖中a為固定化酵母，當(dāng)原料葡萄糖從漏斗口進(jìn)活塞1進(jìn)入反應(yīng)柱，在固定化酵母的發(fā)酵，產(chǎn)物酒精經(jīng)活塞2流出。圖中長的彎形導(dǎo)管有排氣（酵母產(chǎn)生的CO2）和防止外來雜菌污染的作用。

(1)在使用三角瓶時(shí)需依次用封口膜或 6 層紗布和牛皮紙封口后進(jìn)行干熱滅菌；制備的尿素固體培養(yǎng)基可以采用高壓蒸汽滅菌法和G6 玻璃砂漏斗過濾。

(2)結(jié)合前面的分析可知，圖中a是固定化酵母，在該實(shí)驗(yàn)中可以反復(fù)利用；根據(jù)酵母菌的無氧發(fā)酵要求可知，實(shí)驗(yàn)過程一定要在無菌、無氧且溫度和pH適宜等條件下進(jìn)行。為了防止酵母菌會因失水過多而死亡，在發(fā)酵過程中所用的葡萄糖濃度不能過高。如果所采用的葡萄糖濃度較低的情況下反應(yīng)柱流出液中仍含有葡萄糖，其可能原因是反應(yīng)柱中流速過快或者反應(yīng)柱中固定化酵母細(xì)胞數(shù)目較少。

(3)果酒（酵母菌無氧呼吸才能產(chǎn)生酒精）是在無氧條件完成，而果醋發(fā)酵（醋酸菌是需氧菌）需要在氧氣充足的條件下進(jìn)行，所以當(dāng)酒精發(fā)酵旺盛時(shí)，醋桿菌不能將果汁中的糖發(fā)酵為酸。1毫升懸液中待測標(biāo)本（菌體）總數(shù)＝80小方格內(nèi)菌體數(shù)÷80×400÷(2×2×0.1)×103×稀釋倍數(shù)。而臺盼藍(lán)與菌液等體積加入，因此要達(dá)到每毫升3×109個活細(xì)胞的預(yù)期密度，理論上無色細(xì)胞數(shù)應(yīng)該不少于(3×109) ÷(1.25×105×2×103)=120個。（注意：5個中方格含80個小格，而血球計(jì)數(shù)板共400個小格）。

(4)借用比色法測定亞硝酸鹽含量的方法可知，用比色計(jì)測定果醋中葡萄糖含量，需要先制作葡萄糖濃度與光密度值關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線。實(shí)驗(yàn)中一般不能更換比色杯，若制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的比色杯光程小于測定樣液的比色杯光程，測得的樣液中葡萄糖含量偏大。