Question

【題目】前不久，一種名為耳念珠菌的多重耐藥真菌（超級真菌）在美國多地流行。請回答下列有關(guān)問題：

（1）實驗室在培養(yǎng)皿中培養(yǎng)的超級真菌如圖所示，其采用的培養(yǎng)方法最可能為____________________，要從超級真菌與其他細菌混雜的一個菌群中將超級真菌純化，應(yīng)當(dāng)使用的培養(yǎng)基除碳源、氮源、水、無機鹽、維生素以及必需的生長因子外，還需要添加__________制成選擇培養(yǎng)基。

（2）超級真菌的基因（目的基因）在大腸桿菌細胞內(nèi)表達時，表達出的蛋白質(zhì)可能會被降解。為防止蛋白質(zhì)被降解，在實驗中應(yīng)選用____________________的大腸桿菌作為受體細胞，在蛋白質(zhì)純化的過程中應(yīng)添加__________的抑制劑。

（3）固定化技術(shù)包括包埋法、化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法。假定經(jīng)過基因工程處理后的超級真菌具有催化某種反應(yīng)的生物活性，現(xiàn)欲長期使用并保存該超級真菌（突變體X），那么，宜使用的固定化技術(shù)是__________，不選用另外兩種的理由是____________________。

（4）實驗全部結(jié)束后需要對所有儀器以及廢液進行后續(xù)處理。處理玻璃、金屬儀器宜用干熱滅菌法，此過程的溫度為______；處理廢液最適宜放置于高壓蒸汽滅菌鍋中，若未將鍋內(nèi)冷空氣排盡，則會出現(xiàn)______________________________的后果。

Answer 1

【答案】平板劃線法 抗生素 不含蛋白酶基因 蛋白酶 包埋法 包埋法適用于固定化細胞，化學(xué)結(jié)合法與物理吸附法更適合固定酶 160~170℃ 鍋內(nèi)溫度達不到預(yù)設(shè)溫度而影響滅菌

【解析】

1、微生物接種的方法中最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，前者是指通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種，逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面，后者是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。

2、滅菌是指使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外一切微生物的細胞、芽孢和孢子的過程，常用的方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。

3、固定化酶、固定化細胞的比較：

	固定化酶	固定化細胞
酶的種類	一種	一系列酶
制作方法	物理吸附法、化學(xué)結(jié)合法	包埋法
是否需要營養(yǎng)物質(zhì)	否	是
缺點	不利于催化一系列的酶促反應(yīng)	反應(yīng)物不宜與酶接近，尤其是大分子物質(zhì)，反應(yīng)效率下降
優(yōu)點	①既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離②可以反復(fù)利用	成本低，操作容易

（1）培養(yǎng)方法包括平板劃線法和稀釋涂布平板法，稀釋涂布平板法會使菌落在平板上均勻分布，平板劃線法有多次劃線，每次劃線都來自于上一次劃線的末端從而實現(xiàn)稀釋，由圖可知，超級真菌通過平板劃線法接種在固定培養(yǎng)基上；超級真菌為多重耐藥，故在純化培養(yǎng)時，需添加抗生素，只有超級真菌能在添加了抗生素的選擇培養(yǎng)基上生長。

（2）蛋白質(zhì)會被蛋白酶降解，為防止蛋白質(zhì)被降解，在實驗中應(yīng)選用不含蛋白酶基因的大腸桿菌作為受體細胞；在蛋白質(zhì)純化的過程中應(yīng)添加蛋白酶的抑制劑來防止蛋白質(zhì)的降解。

（3）固定化技術(shù)包括包埋法、化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法，現(xiàn)欲長期使用并保存該超級真菌（突變體X），宜使用的固定化技術(shù)是包埋法，包埋法更適合固定細胞，而化學(xué)結(jié)合法與物理吸附法更適合固定酶，真菌屬于細胞，故使用包埋法。

（4）處理玻璃、金屬儀器宜用干熱滅菌法，干熱滅菌法常用的溫度為160~170℃；處理廢液最適宜放置于高壓蒸汽滅菌鍋中，若未將鍋內(nèi)冷空氣排盡，則會出現(xiàn)鍋內(nèi)溫度達不到預(yù)設(shè)溫度而影響滅菌的后果。