Question

17．表中是篩選異養(yǎng)型細(xì)菌的培養(yǎng)基配方．

KH2PO4	1.4g
Na2HPO4	2.1g
MgSO4•7H2O	0.2g
FeCl3	0.1g
X	1g
維生素	微量
瓊脂	15g
將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000mL

（1）苯胺是致癌物質(zhì)，土壤中有分解苯胺的異養(yǎng)型細(xì)菌，此培養(yǎng)基中的成分X除為目的菌提供能源外，還能提供碳源和氮源，該培養(yǎng)基從作用看屬于選擇培養(yǎng)基．制備固體培養(yǎng)基時(shí)調(diào)節(jié)pH在溶化步驟后．
（2）如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，則獲得圖B效果的接種方法是平板劃線法．運(yùn)用圖A所示接種方法統(tǒng)計(jì)的菌落常常比活菌的實(shí)際數(shù)目低．在探究“酵母菌種群數(shù)量變化”實(shí)驗(yàn)中，已知每個(gè)計(jì)數(shù)室由25×16個(gè)小格組成，容納液體的總體積為0.4mm³，觀察到圖中計(jì)數(shù)室所示a、b、c、d、e 5個(gè)中格共有酵母菌80個(gè)，則1mL樣液中約有酵母菌10⁶個(gè)．
（3）在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加酚紅指示劑可初步鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素，原理用方程式表示為CO（NH₂）₂+H₂O$\stackrel{酶}{→}$CO₂+2NH₃；在篩選能夠分解纖維素的微生物過程中，常用到剛果紅染色法．在培養(yǎng)基滅菌后倒平板前以1：200比例加入染液，這種鑒定方法的不足是假陽(yáng)性反應(yīng)的干擾．
（4）培養(yǎng)基通常用高壓蒸汽滅菌法滅菌，若無(wú)條件，也可用間隙滅菌法．其程序是：第一天，將培養(yǎng)基在100℃下維持30min，然后在36～37℃下放置24h；之后重復(fù)前面的操作2-3次．請(qǐng)分析：
①培養(yǎng)基在100℃下維持30min的目的是殺死活的微生物體．
②在36～37℃下放置24h后再加熱的目的是殺死24h中由微生物的芽孢或孢子萌發(fā)而生長(zhǎng)的微生物細(xì)胞．
③怎樣證明間隙滅菌法的效果？將培養(yǎng)基處于37℃下放置3～5d，仍無(wú)微生物生長(zhǎng)．

Answer 1

分析 1、微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要有：碳源、氮源、水和無(wú)機(jī)鹽等．篩選分離微生物時(shí)常用選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)基在滅菌之前要調(diào)整pH，對(duì)培養(yǎng)基要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌．
2、據(jù)圖1 分析，圖示A為平板劃線法接種，圖示B為稀釋涂布平板法接種．
3、分解尿素的細(xì)菌的鑒定細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素．

解答 解：（1）根據(jù)培養(yǎng)基的配方可以看出，所給的物質(zhì)中不能為微生物提供碳源和氮源，因此微生物生長(zhǎng)所需要的碳源和氮源，可以由X提供．該培養(yǎng)基從作用看屬于選擇培養(yǎng)基，在制備固體培養(yǎng)基時(shí)一般要先溶化再調(diào)節(jié)PH值．
（2）B圖為平板劃線法；運(yùn)用A所示接種方法統(tǒng)計(jì)的菌落常常比活菌的實(shí)際數(shù)目低，因?yàn)橐粋�(gè)菌落可能是由一個(gè)或多個(gè)細(xì)菌繁殖形成．5個(gè)中格共有藍(lán)藻80個(gè)，則25個(gè)中格有400個(gè)藍(lán)藻，25個(gè)中格的體積是0.4mm³，所以1ml樣液中約有藍(lán)藻=400÷0.4×1000=10⁶個(gè)．
（3）分解尿素的細(xì)菌的鑒定細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素；在篩選能夠分解纖維素的微生物過程中，常用到剛果紅染色法．在培養(yǎng)基滅菌后倒平板前以1：200比例加入染液，這種鑒定方法的不足是假陽(yáng)性反應(yīng)的干擾．
（4）培養(yǎng)基通常用高壓蒸汽滅菌法滅菌．
①培養(yǎng)基在100℃下維持30min可以殺死活的微生物體．
②在36～37℃下放置24h后再加熱的目的是殺死24h中由微生物的芽孢或孢子萌發(fā)而生長(zhǎng)的微生物細(xì)胞．
③將培養(yǎng)基處于37℃下放置3～5d，仍無(wú)微生物生長(zhǎng)，說(shuō)明間隙滅菌法效果良好．
故答案為：
（1）碳源和氮源　選擇　溶化　
（2）平板劃線法　低　10⁶
（3）酚紅指示劑　CO（NH₂）₂+H₂O$\stackrel{酶}{→}$CO₂+2NH₃    剛果紅  1：200  假陽(yáng)性反應(yīng)的干擾
（4）高壓蒸汽滅菌    ①殺死活的微生物體�、跉⑺�24 h中由微生物的芽孢或孢子萌發(fā)而生長(zhǎng)的微生物細(xì)胞　③將培養(yǎng)基處于37℃下放置3～5 d，仍無(wú)微生物生長(zhǎng)

點(diǎn)評(píng) 本題主要考查微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、平板計(jì)數(shù)法和尿素分解菌的篩選鑒定等內(nèi)容，意在加強(qiáng)學(xué)生對(duì)相關(guān)知識(shí)點(diǎn)的識(shí)記與理解．