Question

【題目】GDNF是一種神經營養(yǎng)因子。對損傷的神經細胞具有營養(yǎng)和保護作用。研究人員構建了含GDNF基因的表達載體（如圖所示），并導入到大鼠神經干細胞中，用于干細胞基因治療的研究。請回答：

（1）完成圖中A過程必需的工具是 ；該基因治療的受體細胞為 。

（2）若要構建含GDNF基因的表達載體，則需選擇圖中的 限制酶進行酶切。

（3）如下圖表示四種質粒，其中，箭頭所指部位為酶的識別位點，質粒的陰影部分表示標記基因。適于作為圖示GDNF基因運載體的是 。

（4）下列有關限制性核酸內切酶和質粒運載體的描述，錯誤的是______（多選）

A．限制性核酸內切酶能識別DNA、切割DNA任一序列

B．限制性核酸內切酶的作用部位與RNA聚合酶的完全相同

C．使用質粒運載體是為了避免目的基因被分解

D．質粒運載體可能是從細菌或者病毒的DNA改造的

（5）經酶切后的載體和GDNF基因進行連接，連接產物經篩選得到的載體主要有三種：單個載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接（如圖所示，且載體大小為6000bp）。為鑒定這3種連接方式，選擇HpaI酶和BamHI酶對篩選的載體進行雙酶切，若是正向連接的重組載體，其產生的酶切片段數為 個，反向連接的重組載體產生片段有 （多選）。

①100bp ②200bp ③600bp ④700bp ⑤6000bp ⑥6500bp

Answer 1

【答案】

（1）限制酶（限制性核酸內切酶）和DNA連接酶 （大鼠）神經干細胞

（2）XhoⅠ

（3）A

（4）ABD

（5）2 ②⑥

【解析】

試題分析：

（1）A過程表示目的基因的獲取與基因表達載體的構建需要用限制酶和DNA連接酶；研究人員構建了含GDNF基因的表達載體（如圖所示），并導入到大鼠神經干細胞中，用于干細胞基因治療的研究。

（2）要構建含GDNF基因的表達載體，應用XhoⅠ限制酶，其可以保證目的基因完整。

（3）運載體要有限制酶切割位點，保證目的基因能插入，同時不能破壞標記基因，因此選A。

（4）限制性核酸內切酶能識別DNA，能識別特定的核苷酸序列，A錯誤；限制性核酸內切酶能識別特定的核苷酸序列，而RNA聚合酶識別的是啟動子，B錯誤；質粒是原核生物中除擬核之外的能獨立復制的DNA，病毒中沒有，D錯誤。

（5）正向鏈接的表達載體上有HpaI酶和BamHI酶兩個切割位點，切割后形成兩個片段；質粒和目的基因反向連接后的基因表達載體的大小為6700bp，HpaI酶和BamHI酶切割位點之間的長度為200bp，則剩余片段大小為6500bp。