Question

4．科學(xué)家利用PCR技術(shù)分別從抗根結(jié)線蟲的番茄和辣椒中克降抗性基因SIMi及Ca-Mi，并利用遺傳轉(zhuǎn)化方法將它們轉(zhuǎn)入對(duì)根結(jié)線蟲敏感的番茄中，獲得抗根結(jié)線蟲的番茄轉(zhuǎn)基因株系應(yīng)用于植物抗根結(jié)線蟲育種．請(qǐng)回答相關(guān)問題：
（1）PCR技術(shù)是擴(kuò)增目的基因的常用手段．?dāng)U增過程中，目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈，引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合，在酶的作用下進(jìn)行延伸．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建是實(shí)施基因工程的核心．
（3）將目的基因轉(zhuǎn)入對(duì)根結(jié)線蟲敏感的番茄中，最常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．通過轉(zhuǎn)化，目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)．
（4）為了檢測對(duì)根結(jié)線蟲敏感的番茄中是否插入目的基因，可采用DNA分子雜交技術(shù)技術(shù)．檢測目的基因在分子層面是否表達(dá)則可以用抗原--抗體雜交的方法．
（5）為了比較兩種抗性基因（SIMi和CaMi）在轉(zhuǎn)基因后的抗根結(jié)線蟲的效果，可分別取等量的兩種成功表達(dá)的轉(zhuǎn)基因番茄植株接種等量根結(jié)線蟲，比較其抗蟲效果．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過程中，首先進(jìn)行高溫解鏈，即目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈；然后再低溫復(fù)性，即引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合；最后中溫延伸，即在酶的作用下進(jìn)行延伸．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建是實(shí)施基因工程的核心．
（3）將目的基因轉(zhuǎn)入對(duì)根結(jié)線蟲敏感的番茄中，最常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．通過轉(zhuǎn)化，目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)．
（4）分子水平上的檢測：為了檢測對(duì)根結(jié)線蟲敏感的番茄中是否插入目的基因，可采用DNA分子雜交技術(shù)技術(shù)．檢測目的基因在分子層面是否表達(dá)則可以用抗原--抗體雜交的方法．
（5）個(gè)體水平上的鑒定：為了比較兩種抗性基因（SIMi和CaMi）在轉(zhuǎn)基因后的抗根結(jié)線蟲的效果，可分別取等量的兩種成功表達(dá)的轉(zhuǎn)基因番茄植株接種等量根結(jié)線蟲，比較其抗蟲效果．
故答案為：
（1）受熱變性       引物
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建
（3）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法     維持穩(wěn)定和表達(dá)
（4）DNA分子雜交技術(shù)    抗原--抗體雜交
（5）接種等量根結(jié)線蟲

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程和胚胎工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)問題，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．