Question

【題目】以下是基因工程四個主要操作步驟：①基因表達載體的構(gòu)建；②將目的基因?qū)�入受體細胞；③目的基因的獲��；④目的基因的檢測與鑒定。請分析回答相關(guān)問題：

(1)基因工程操作的正確步驟是 ____（填數(shù)字）。

(2)進行③操作時，可以從基因文庫中獲取，基因文庫分為基因組文庫和______兩種，其區(qū)別是______；PCR擴增也是獲取目的基因常用的方法，進行PCR時，需要向擴增儀中加入熱穩(wěn)定DNA聚合酶、四種原料、_____以及引物，合成引物的前提是____。

(3)進行操作①時，應先選擇合適的載體，常見的載體是質(zhì)粒，質(zhì)粒的本質(zhì)是_______；右圖是常用的pBR322質(zhì)粒載體，該質(zhì)粒含有抗氨芐西林基因(Ampt)和抗四環(huán)素基因(Tetr)，兩個抗性基因中均具有限制酶酶切位點。若用限制酶Psl I切割并構(gòu)建好表達載體，后將構(gòu)建好的表達載體導入受體菌中，若受體菌_____，則說明目的基因插入到了pBR322載體中。若受體菌____，則說明目的基因沒有插入到pBR322載體中。

Answer 1

【答案】 ③①②④ 部分基因文庫 基因組文庫包含一種生物的全部基因而部分基因分庫只包含該種生物的部分基因 模板DNA 有一段已知的目的基因核苷酸序列 雙鏈環(huán)狀DNA分子 只有抗四環(huán)素性狀 既有抗氨芐西林性狀也有抗四環(huán)素性狀

【解析】試題基因工程的基本操作步驟：目的基因的獲取→基因表達載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)�入受體細胞→目的基因的檢測與鑒定。

（1）根據(jù)前面的分析可知，基因工程步驟的操作順序是③①②④。

（2）基因文庫分為基因組文庫和部分基因文庫兩種，其區(qū)別在于前者包含一種生物的全部基因，而后者只包含該種生物的部分基因；進行PCR擴增時，需要四個基本條件是熱穩(wěn)定DNA聚合酶、四種原料、模板DNA以及引物，其中合成引物的前提是有一段已知的目的基因核苷酸序列。

（3）質(zhì)粒是基因工程中最常用的載體，其實質(zhì)是小型環(huán)狀DNA，如題圖中pBR322質(zhì)粒。由于該質(zhì)粒中含有抗氨芐西林基因(Ampt)和抗四環(huán)素基因(Tetr)兩個標記基因，其中Ampt中含有限制酶Psl I切割位點，如果用Psl I切割目的基因和該質(zhì)粒，讓它們連接形成重組質(zhì)粒，則該重組質(zhì)粒只含1種完整的Tetr的標記基因，所以導入了該重組質(zhì)粒的受體菌只能抗四環(huán)素，不能抗氨芐西林。即是說，受體菌中導入了該重組質(zhì)粒，則受體菌只出現(xiàn)抗四環(huán)素的性狀；若受體菌出現(xiàn)既抗四環(huán)素性狀，又抗氨芐西林性狀，則說明導入的不是重組質(zhì)粒，而是不含目的基因的正常質(zhì)粒。