Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉(zhuǎn)運肽基因相連，導入油菜葉片細胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種．

（1）從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉(zhuǎn)運肽基因，然后利用_____技術(shù)分別進行擴增．

（2）如圖1，選用圖中的限制酶_____處理兩個基因后再用_____酶處理，得到_____（填圖中字母）端相連的融合基因．

（3）將上述融合基因插入圖2所示Ti質(zhì)粒的T﹣DNA中，構(gòu)建_____并導入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含_____的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液．

（4）剪取油菜的葉片放入浸染液中一段時間，此過程的目的是_____，進一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜．

（5）用DNA﹣RNA分子雜交技術(shù)確定融合基因是否完成了_____（轉(zhuǎn)錄、翻譯）．

Answer 1

【答案】 PCR（聚合酶鏈式反應/多聚酶鏈式反應） ClaⅠ DNA連接 A、D 基因表達載體 四環(huán)素 將目的基因?qū)�入受體細胞 轉(zhuǎn)錄

【解析】試題解析：本題以圖文結(jié)合的形式綜合考查學生對基因工程的知識的識記和理解能力。解答本題需熟記并理解基因工程的基本操作程序并形成清晰的知識網(wǎng)絡。在此基礎上，結(jié)合問題情境，從題圖和題意中提取有效信息進行相關(guān)問題的解答。

(1) 依題意可知：酶D基因與轉(zhuǎn)運肽基因都屬于目的基因，擴增目的基因，可利用PCR(或聚合酶鏈式反應或多聚酶鏈式反應)技術(shù)。

(2) 酶D基因的A端與轉(zhuǎn)運肽基因的D端均含有ClaI的識別位點，因此可選用ClaⅠ限制酶處理兩個基因后獲得相同的粘性末端，再用DNA連接酶處理，得到A、D端相連的融合基因。

(3) 將上述融合基因插入上圖所示Ti質(zhì)粒的T—DNA中，構(gòu)建基因表達載體即重組質(zhì)粒并導入農(nóng)桿菌中。因用于構(gòu)建基因表達載體的Ti質(zhì)粒上有四環(huán)素抗性基因，所以成功導入基因表達載體的農(nóng)桿菌可在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長，為將其篩選出來，可將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落。

(4) 剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜細胞并插入到其染色體DNA上，進一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜。

(5) 確定融合基因是否完成了轉(zhuǎn)錄過程，可采用DNA—RNA分子雜交技術(shù)。