Question

11．某同學用新鮮的泡菜濾液為實驗材料分離純化乳酸菌．分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣．回答下列問題：
（1）分離純化乳酸菌時，首先箝要用無菌水對泡菜濾液進行梯度稀釋．梯度稀釋的目的是泡菜濾液中乳酸菌的濃度高，直接分離很難分離到單個菌落（為了聚集在一起的微生物分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落）．
（2）推測在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用除了可以中和產(chǎn)生的乳酸以外，還可以鑒別乳酸菌．分離純化時應挑選出具有透明圈的菌落作為候選菌．
（3）若該同學采用稀釋涂布平板法來檢測泡菜濾液中乳酸菌的含量，先將lmL泡菜濾液稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0．lmL稀釋液，經(jīng)適當培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37．據(jù)此可得出每毫升濾液中的活菌數(shù)為3.8×10⁴個．
（4）若對篩選得到的乳酸菌進一步純化，宜采用的純化方法是平板劃線法．乳酸菌在20℃長期保存時，菌液中常需要加入一定量的甘油．

Answer 1

分析 1、稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細菌數(shù)時，在每一個梯度濃度內(nèi)，至少要涂布3個平板，選擇菌落數(shù)在30～300的進行記數(shù)，求起平均值，再通過計算得出土壤中細菌總數(shù)．
2、泡菜發(fā)酵的實驗原理：
（1）乳酸菌在無氧條件下，將糖分解為乳酸．
（2）利用乳酸菌制作泡菜的過程中會引起亞硝酸鹽的含量的變化．
溫度過高，食鹽用量不足10%、腌制時間過短，容易造成細菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加．一般在腌制10天后，亞硝酸鹽的含量開始下降．
（3）測定亞硝酸鹽含量的原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標準顯色液目測比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量．

解答 解：（1）分離純化乳酸菌時，首先要用無菌水對泡菜濾液進行梯度稀釋．泡菜濾液中乳酸菌的濃度高，直接分離很難分離到單個菌落，因此需要對泡菜濾液進行梯度稀釋．
（2）在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用是中和乳酸菌代謝過程中產(chǎn)生的乳酸和利于乳酸菌的識別和分離；分離純化時應挑選出在平板上有透明圈的菌落作為候選菌．
（3）若該同學采用稀釋涂布平板法來檢測泡菜濾液中乳酸菌的含量，先將lmL泡菜濾液稀釋100倍，在3個平板上用涂布法分別接入0．lmL稀釋液，經(jīng)適當培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37．據(jù)此可得出每毫升濾液中的活菌數(shù)為=（39+38+37）÷3÷0.1×100=3.8×10⁴個．
（4）若對篩選得到的乳酸菌進一步純化，宜采用的純化方法是平板劃線法．乳酸菌在20℃長期保存時，菌液中常需要加入一定量的甘油．
故答案為：
（1）泡菜濾液中乳酸菌的濃度高，直接分離很難分離到單個菌落（為了聚集在一起的微生物分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落）
（2）鑒別乳酸菌     具有透明圈
（3）3.8×10⁴
（4）平板劃線法     甘油

點評 本題考查微生物的分離與培養(yǎng)以及泡菜制作的相關知識，對于此類試題，需要考生注意的細節(jié)較多，如實驗的原理、實驗選用的材料、實驗采用的試劑及試劑的作用、實驗現(xiàn)象等，需要考生在平時的學習過程中注意積累．