Question

【題目】如圖所示，若用兩種識別切割序列完全不同的限制酶E和F從基因組DNA上切下目的基因，并將之取代質(zhì)粒pZHZ1(3.7kb，1kb=1000對堿基)上相應(yīng)的E—F區(qū)域(0.2kb)。

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（1）已知在質(zhì)粒pZHZl中，限制酶G切割位點(diǎn)距限制酶E切割位點(diǎn)0．8kb，限制酶H切割位點(diǎn)距限制酶F切割位點(diǎn)O．5kb。若分別用限制酶G和H酶切兩份重組質(zhì)粒pZHZ2樣品，據(jù)表所列為酶切結(jié)果。請將目的基因內(nèi)部的限制酶G和H切割位點(diǎn)標(biāo)注在下圖中。

（2）若想在大腸桿菌中收獲上述目的基因的表達(dá)產(chǎn)物，則需將重組質(zhì)粒pZHZ2導(dǎo)入感受態(tài)細(xì)胞，感受態(tài)細(xì)胞的含義是______。目的基因能否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是______。

（3）PCR技術(shù)DNA合成的方向總是從子鏈的_____延伸。PCR的每次循環(huán)分為_____三步。

Answer 1

【答案】 細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài) 轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因 5'端向3'端延伸 變性→復(fù)性→延伸

【解析】試題分析：本題以圖文結(jié)合的形式綜合考查學(xué)生對基因工程的知識的識記和理解能力。解答本題需熟記并理解基因工程的基本操作程序并形成清晰的知識網(wǎng)絡(luò)。在此基礎(chǔ)上，結(jié)合問題情境，從題圖和題意中提取有效信息，進(jìn)行相關(guān)問題的解答。

(1) 依題意和表中信息可知：質(zhì)粒pZHZ1長度為3.7kb，切去EF之間的片段（0.2kb）還剩3.5kb，含有1個限制酶G切割位點(diǎn)和1個限制酶H切割位點(diǎn)，限制酶G切割位點(diǎn)距限制酶E切割位點(diǎn)0.8kb，限制酶H切割位點(diǎn)距限制酶F切割位點(diǎn)O.5kb。分別用限制酶G和H酶切兩份重組質(zhì)粒pZHZ2，得到兩種長度的片段，說明重組質(zhì)粒pZHZ2的長度為1.6＋3.1＝4.7 kb，且含有2個限制酶G切割位點(diǎn)和2個限制酶H切割位點(diǎn)，因此目的基因長度為4.7－3.5＝1.2kb，目的基因中也有1個限制酶G切割位點(diǎn)和1個限制酶H切割位點(diǎn)。用限制酶G切重組質(zhì)粒pZHZ2，得到1.6 kb和3.1 kb兩種片段，說明目的基因內(nèi)部的限制酶G切割位點(diǎn)距原有的限制酶E切割位點(diǎn)1.6－0.8＝0.8kb；用限制酶H切重組質(zhì)粒pZHZ2，得到1.2kb和3.15kb兩種片段，說明目的基因內(nèi)部的限制酶H切割位點(diǎn)距原有的限制酶F切割位點(diǎn)1.2－0.5＝0.7kb。標(biāo)注的示意圖見答案。

(2) 感受態(tài)細(xì)胞的含義是：細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)。目的基因能否在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是：轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因。

(3) PCR技術(shù)DNA合成的方向總是從子鏈的5'端向3'端延伸；PCR的每次循環(huán)分為三步：變性→復(fù)性→延伸。