Question

【題目】乳酸菌指發(fā)酵糖類主要產(chǎn)物為乳酸的一類革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的總稱，經(jīng)革蘭氏染色后呈紫色。分離乳酸菌常用MRS固體培養(yǎng)基：蛋白5g、牛肉膏5g、酵母提取物2.5g、檸檬酸二銨1g、水500mL、乙酸鈉2.5g、K2HPO4 1 g、MNSO4.●4H2O 0.125g、瓊脂12.5g、MgSO4●7H2O 0.29g、CaCO35g、葡萄糖10g。請(qǐng)回答：

(1)MRS培養(yǎng)基中瓊脂的作用是____。MRS培養(yǎng)基需要用高壓蒸汽滅菌法滅菌，滅菌時(shí)設(shè)置的壓力和時(shí)間分別為_____、_____。滅菌后制作平板用于實(shí)驗(yàn)，對(duì)平板進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)的方法是______。使用涂布法分離乳酸菌，培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)平板上形成的單菌落周圍會(huì)產(chǎn)生CaCO3溶解圈，溶解圈大小能夠反映_______。

(2)若用革蘭氏染色法對(duì)大腸桿菌進(jìn)行染色，結(jié)果______ (填“是”或“否”)呈紫色。

(3)用乳酸菌制作酸乳時(shí)，可對(duì)乳酸菌進(jìn)行固定化處理，方法為：稱取適量海藻酸鈉配成水溶液，加入乳酸菌并攪拌均勻，以一定速度滴入CaCI2溶液中形成凝膠，使其凝固成珠狀。上述采用的固定方法是_______，凝膠珠撈出后要用無(wú)菌水沖洗，目的是洗去______。

(4)乳酸菌可用于泡菜制作。在對(duì)泡菜制作過(guò)程中的亞硝酸鹽定量檢測(cè)時(shí)，若樣液測(cè)定時(shí)的比色杯光程小于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的比色杯光程，則測(cè)得的樣液中亞硝酸鹽含量___ (填“偏大”或“偏小”或“不影響”)；若泡菜樣液測(cè)得的OD值過(guò)大，超出標(biāo)準(zhǔn)曲線，則最適宜的做法是___。

Answer 1

【答案】凝固劑 500g/cm2 30分鐘 將空白平板置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，觀察有無(wú)雜菌生長(zhǎng) 乳酸菌產(chǎn)乳酸的量的大小（答“乳酸菌產(chǎn)乳酸的能力的大小”給分） 否 包埋法 凝珠表面的CaCl2溶液 偏小 對(duì)樣品溶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋

【解析】

（1）瓊脂在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，在常規(guī)培養(yǎng)條件下呈固態(tài)。（2）獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵，培養(yǎng)基配制時(shí)全程要求無(wú)菌操作，常采用高壓蒸汽滅菌法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。不同種類的微生物往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間，細(xì)菌一般在30～37℃的溫度下培養(yǎng)1～2d。為了檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格或培養(yǎng)過(guò)程中是否被雜菌污染，在培養(yǎng)接種物時(shí)還應(yīng)設(shè)置一個(gè)無(wú)菌的平板作為對(duì)照。（3）利用溶鈣圈法對(duì)乳酸菌進(jìn)行篩選的原理是乳酸菌產(chǎn)生的酸性物質(zhì)和CaCO3反應(yīng)而出現(xiàn)溶解圈。革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌經(jīng)革蘭氏染色后呈紫色。（4）固定化酶和固定化細(xì)胞是利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)，包括包埋法、化學(xué)結(jié)合法和物理吸附法。細(xì)胞個(gè)大，難以被吸附或結(jié)合，多采用包埋法固定化。（5）測(cè)定亞硝酸鹽含量的操作步驟是：①分別在待測(cè)樣品溶液和已知濃度的亞硝酸鹽溶液(標(biāo)準(zhǔn)溶液)中加入等量顯色劑。②在兩個(gè)光程為1 cm的比色杯中分別加入樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)液。③分別將兩個(gè)比色杯在550 nm處測(cè)定光密度值（OD值）。④通過(guò)換算，即可知兩個(gè)比色杯中待測(cè)物質(zhì)的比例。因一杯中為已知濃度的亞硝酸鹽溶液，則可得待測(cè)樣品中亞硝酸鹽濃度。

(1) 瓊脂在常規(guī)培養(yǎng)條件下呈固態(tài)，因此在MRS培養(yǎng)基中，瓊脂的作用是凝固劑。采用高壓蒸汽滅菌法對(duì)MRS培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí)，設(shè)置的壓力和時(shí)間分別為500g/cm2、30分鐘。為了檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，需要將滅菌后的空白平板置于37℃恒溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，觀察有無(wú)雜菌生長(zhǎng)。乳酸菌產(chǎn)生的乳酸和CaCO3反應(yīng)而出現(xiàn)溶解圈，溶解圈的大小能夠反映乳酸菌產(chǎn)乳酸的量的大小。

(2) 大腸桿菌是革蘭氏陰性細(xì)菌，用革蘭氏染色法對(duì)大腸桿菌進(jìn)行染色，結(jié)果不會(huì)呈現(xiàn)紫色。

(3) 分析題文描述可知：對(duì)乳酸菌進(jìn)行固定化處理，采用的是包埋法。將新制得的固定化乳酸菌凝膠珠用無(wú)菌水沖洗，其目的是洗去凝膠珠表面的CaCl2溶液。

(4) 在對(duì)泡菜制作過(guò)程中的亞硝酸鹽定量檢測(cè)時(shí)，若樣液測(cè)定時(shí)的比色杯光程小于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的比色杯光程，則測(cè)得的樣液中亞硝酸鹽含量偏小。若泡菜樣液測(cè)得的OD值過(guò)大，超出標(biāo)準(zhǔn)曲線，則最適宜的做法是對(duì)樣品溶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋。