【題目】在基因工程的操作過程中,有多種方法可檢測目的基因是否導(dǎo)入受體菌;卮鹣铝袉栴}:

(1)PCR檢測法:根據(jù)一段已知目的基因的核苷酸序列設(shè)計______________,對受體菌DNA進(jìn)行擴(kuò)增,經(jīng)過解鏈、______________、延伸三個步驟的循環(huán),檢測PCR產(chǎn)物的長度是否與目的基因一致。

(2)熒光蛋白基因篩選法:某種熒光蛋白(GFP)在紫外線照射下會發(fā)出綠色熒光。用_____________酶將目的基因和GFP基因拼接成融合基因,并與____________重組后導(dǎo)入受體菌,經(jīng)培養(yǎng)篩選能發(fā)出綠色熒光的菌落。

(3)環(huán)絲氨酸輔助篩選法:四環(huán)素能使細(xì)菌停止生長但不致死;環(huán)絲氨酸能使正常生長的細(xì)菌致死,而對停止生長的細(xì)菌不致死。某質(zhì)粒如圖所示(Ampr表示氨芐青霉素抗性基因,Tetr表示四環(huán)素抗性基因),Tetr中插入目的基因后失活。用此質(zhì)粒構(gòu)建表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化細(xì)菌后,結(jié)果有3種:未轉(zhuǎn)化的細(xì)菌、含質(zhì)粒的細(xì)菌、含重組質(zhì)粒的細(xì)菌。

①用含有______________________的培養(yǎng)基對上述3種細(xì)菌進(jìn)行篩選,只有含質(zhì)粒的細(xì)菌被淘汰,理由是______________;

②在上述篩選的基礎(chǔ)上,若要篩選出含重組質(zhì)粒的細(xì)菌,還需使用含有的______________培養(yǎng)基。

【答案】引物 復(fù)性(退火) DNA連接 運(yùn)載體 四環(huán)素 環(huán)絲氨酸 含質(zhì)粒的細(xì)菌有Tetr,四環(huán)素對其不起作用,環(huán)絲氨酸使其致死 氨芐青霉素

【解析】

PCR原理:在解旋酶作用下,打開DNA雙鏈,每條DNA單鏈作為母鏈,以4種游離脫氧核苷酸為原料,合成子鏈,在引物作用下,DNA聚合酶從引物3'端開始延伸DNA鏈,即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的,DNA的復(fù)制需要引物,其主要原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈,PCR反應(yīng)過程是:變性→復(fù)性→延伸;蚬こ滩僮髦幸玫较拗泼、DNA連接酶、載體,限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂,DNA連接酶用于連接目的基因和載體;根據(jù)質(zhì)粒圖顯示,質(zhì)粒中含有AmprTetr,目的基因的插入位點(diǎn)位于Tetr中,轉(zhuǎn)化細(xì)菌后有3種結(jié)果:未轉(zhuǎn)化的細(xì)菌、含質(zhì)粒的細(xì)菌、含重組質(zhì)粒的細(xì)菌,其中未轉(zhuǎn)化的細(xì)菌在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上停止生長,含質(zhì)粒的細(xì)菌在四環(huán)素和氨芐青霉素培養(yǎng)基上能生長,含重組質(zhì)粒的細(xì)菌在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上停止生長,但在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生長。

1PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定的DNA片段的核酸合成技術(shù),前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便根據(jù)這一序列合成引物;對受體菌DNA進(jìn)行擴(kuò)增,經(jīng)過解鏈、復(fù)性、延伸三個步驟的循環(huán),檢測PCR產(chǎn)物的長度是否與目的基因一致。

2)熒光蛋白基因篩選法:某種熒光蛋白(GFP)在紫外線照射下會發(fā)出綠色熒光。用DNA連接酶將目的基因和GFP基因拼接成融合基因,并與運(yùn)載體重組后導(dǎo)入受體菌,經(jīng)培養(yǎng)篩選能發(fā)出綠色熒光的菌落。

3)①用含有四環(huán)素和環(huán)絲氨酸的培養(yǎng)基對上述3種細(xì)菌進(jìn)行篩選,只有含質(zhì)粒的細(xì)菌被淘汰,原因是含質(zhì)粒的細(xì)菌有Tetr,四環(huán)素對其不起作用,能正常生長,而環(huán)絲氨酸能使其致死。

②四環(huán)素能使細(xì)菌停止生長但不致死,環(huán)絲氨酸能使正常生長的細(xì)菌致死,而對停止生長的細(xì)菌不致死,先在含有四環(huán)素和環(huán)絲氨酸的培養(yǎng)基上篩選出未轉(zhuǎn)化的細(xì)菌和含重組質(zhì)粒的細(xì)菌,未轉(zhuǎn)化的細(xì)菌在含四環(huán)素培養(yǎng)基上停止生長,環(huán)絲氨酸不使其致死,含重組質(zhì)粒的細(xì)菌由于四環(huán)素抗性基因被破壞,故在含四環(huán)素培養(yǎng)基上停止生長,而環(huán)絲氨酸對其不致死,重組質(zhì)粒在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能生長,若要篩選出含重組質(zhì)粒的細(xì)菌,還需使用含有的氨芐青霉素培養(yǎng)基。

練習(xí)冊系列答案
相關(guān)習(xí)題

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【題目】某果蠅(2n=8)的基因型為AaBb,甲、乙分別表示某卵細(xì)胞形成過程中不同時期的細(xì)胞分裂圖(僅顯示兩對基因所在的染色體)。相關(guān)敘述錯誤的是

A. 甲細(xì)胞為初級卵母細(xì)胞,含有3對常染色體

B. 乙細(xì)胞中含1個染色體組,1條X染色體

C. 形成乙細(xì)胞過程中發(fā)生了染色體易位

D. 卵細(xì)胞基因型可能為aB或ab或Ab或AB

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【題目】關(guān)于細(xì)胞呼吸的敘述,正確的是

A. 無氧呼吸能產(chǎn)生ATP,但沒有[H]的生成過程

B. 有氧呼吸過程中產(chǎn)生的[H]可在線粒體內(nèi)氧化生成H2O

C. 呼吸作用產(chǎn)生的能量均以熱能釋放

D. 呼吸作用的產(chǎn)物對其產(chǎn)生毒害作用

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【題目】下列關(guān)于細(xì)胞呼吸的敘述,錯誤的是

A. 細(xì)胞呼吸是一系列有控制的氧化還原反應(yīng)

B. lmol葡萄糖完全氧化為二氧化碳和水,約產(chǎn)生38mol的ATP

C. 酵母菌在有氧的條件下進(jìn)行需氧呼吸,在無氧的情況下進(jìn)行厭氧呼吸

D. 葉肉細(xì)胞在光照下進(jìn)行光合作用,不進(jìn)行細(xì)胞呼吸

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科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】某種鰻儷在淡水中生長,到海洋中產(chǎn)卵。鰻儷進(jìn)入海水后,吞飲海水,Na+進(jìn)入血液,通過鰓上皮細(xì)胞排出。洄游到淡水時,不再吞飲水。圖示鰓上皮細(xì)胞的Na+-K+-ATP酶活性和Na+排出量的變化。下列分析錯誤的是

A. 鰻儷吞飲海水后,使細(xì)胞外液滲透壓升高

B. Na+排出量與Na+-K+-ATP酶活性正相關(guān)

C. 在淡水中鰓上皮細(xì)胞Na+-K+-ATP酶活性上升

D. 鰻儷由海水洄游進(jìn)入淡水,尿量增加

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科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】如圖所示,圖a、b、c為對胚芽鞘做不同處理的實(shí)驗(yàn),圖d為一植株被紙盒罩住,紙盒的一側(cè)開口,有單側(cè)光照。下列對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的描述,正確的是(  )

A. 圖a、b向光彎曲生長,圖c背光彎曲生長

B. 圖a直立生長,圖b、c向光彎曲生長

C. 圖d中如果固定植株,旋轉(zhuǎn)紙盒,一段時間后,植株向左彎曲生長

D. 圖d中如果將紙盒和植株一起旋轉(zhuǎn),則植株向紙盒開口方向彎曲生長

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科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】1)下圖是洋蔥鱗片葉表皮細(xì)胞的示意圖。

圖中①主要由纖維素和果膠組成,具有全透性, 原生質(zhì)層是由圖中的________組成(填圖中序號)的。如果把此細(xì)胞放入03 g/mL的蔗糖溶液中,將會出現(xiàn)質(zhì)壁分離。要想使質(zhì)壁分離復(fù)原,最簡單的方法使將這個植物細(xì)胞放在________中就可以了。

2)下圖表示利用紫色洋蔥鱗片葉作為實(shí)驗(yàn)材料,觀察植物細(xì)胞質(zhì)壁分離與復(fù)原的基本操作步驟,請據(jù)圖回答下面的問題。

①你認(rèn)為該實(shí)驗(yàn)有無對照實(shí)驗(yàn)________(/)。

C步驟中吸水紙的作用是__________________________________________。

③在F步驟時,若觀察到細(xì)胞質(zhì)壁分離后不能復(fù)原,最可能的原因是___________________________________________________________________。

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科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】如圖甲、乙分別表示人體體液中物質(zhì)交換、生態(tài)系統(tǒng)碳循環(huán)的模型圖,以下說法正確的是()

A. 人體 O2 濃度最高的是甲圖中的 B

B. 乙圖中的 D 是生態(tài)系統(tǒng)中的主要成分

C. 人體發(fā)生過敏反應(yīng)時,甲圖中的 A 增加導(dǎo)致組織水腫

D. 因捕食關(guān)系而建立的食物鏈中,能量最少的是乙圖中的 B 所處的營養(yǎng)級

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科目:高中生物 來源: 題型:

【題目】細(xì)胞與細(xì)胞之間可以通過信號物質(zhì)進(jìn)行信息傳遞(如圖所示)。下列說法錯誤的是

A. 若信號物質(zhì)是神經(jīng)遞質(zhì),則靶細(xì)胞一定為神經(jīng)細(xì)胞

B. 若信號物質(zhì)是抗原分子,則靶細(xì)胞可能是記憶細(xì)胞

C. 若信號物質(zhì)是促甲狀腺激素,則靶細(xì)胞是甲狀腺細(xì)胞

D. 若信號物質(zhì)是胰島素,則靶細(xì)胞是肝細(xì)胞、肌肉細(xì)胞等

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