Question

【題目】肺細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增強，會引發(fā)肺癌。研究人員在體外利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)�入肺癌細胞實現(xiàn)表達，發(fā)現(xiàn)肺癌細胞的增殖受到抑制，其影響機理如圖，請回答下列問題：

（1）獲取let-7基因后，進行基因擴增應(yīng)采用_____________技術(shù)，該技術(shù)依據(jù)的原理是_____________。在操作步驟中需要加熱至90～95℃使________，然后降溫至55～60℃，使_____________。

（2）在進行肺癌細胞培養(yǎng)時，對培養(yǎng)液要進行無菌處理，通常還添加一定量的_____________，以防止培養(yǎng)過程中的雜菌污染；使用合成培養(yǎng)基時，通常加入_____________等一些天然成分。

（3）根據(jù)圖示分析，可從細胞中提取 ______________進行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由于細胞中_____（填“RASmRNA”或“RAS蛋白”）含量減少引起的。

Answer 1

【答案】PCR DNA雙鏈復制 DNA解鏈 引物結(jié)合到互補DNA鏈 抗生素 血清（血漿） RNA（或mRNA） RAS蛋白

【解析】

圖示表示let-7基因影響癌基因RAS的表達的原理，let-7基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物miRNA與RAS基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RAS mRNA結(jié)合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細胞中的RAS蛋白含量減少，進而導致癌細胞增殖受到抑制。

（1）如果要在短時間內(nèi)獲得較多的目的基因，通常采用PCR技術(shù)，該技術(shù)原理是DNA雙鏈復制。在操作步驟中需要加熱至90-95℃使目的基因DNA受熱變性解鏈為單鏈，即高溫解鏈；然后降溫至55-65℃，其目的是使引物和模板鏈結(jié)合，即低溫復性；第二次升溫是使DNA復制開始進行。

（2）在進行細胞培養(yǎng)時，對培養(yǎng)液要進行無菌處理，通常還添加一定量的抗生素，以防止培養(yǎng)過程中的污染；使用合成培養(yǎng)基時，通常加入血清、血漿等一些天然成分。

（3）判斷目的基因是（let-7基因）否在受體細胞中轉(zhuǎn)錄，可用分子雜交技術(shù)來進行檢測，從細胞中提取RNA（或mRNA），與放射性同位素或者熒光標記的目的基因單鏈DNA片段雜交。根據(jù)題中信息“肺組織細胞中的let7基因表達減弱，癌基因RAS表達就增強，引發(fā)肺癌”，導入let7基因后，肺癌細胞受到抑制，說明RAS基因表達減弱，導致細胞中的RAS蛋白含量減少，進而導致癌細胞受抑制。