Question

9．幽門螺桿菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化道潰瘍的主要致病因素，其不良預(yù)后是胃癌．據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，目前我國有超過50%人感染了Hp病菌．Hp是微需氧菌，環(huán)境氧要求5%～8%，在大氣或絕對厭氧環(huán)境下均能生長，Hp的尿素酶極為豐富，尿素酶催化尿素水解形成“氨云”保護細菌在高酸環(huán)境下生存．
在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進行分離培養(yǎng)．實驗基本步驟如下：
配制培養(yǎng)基→滅菌、倒平板→X→培養(yǎng)→觀察．請回答：
（1）在配制培養(yǎng)基時，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因為Hp含有尿素酶，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則菌落周圍會出現(xiàn)紅色環(huán)帶．
（2）步驟X的操作如圖所示：

①微生物接種的方法很多，但都要注意防止雜菌的污染；圖所示方法為稀釋涂布平板法．
②圖示每次取樣前需用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，目的是使微生物和無菌水混合均勻．
③下列關(guān)于此實驗的操作，正確的是C．
A．高壓蒸汽滅菌加熱結(jié)束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋
B．含酚紅指示劑的尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基滅菌后，冷卻至室溫倒平板
C．取10³、10⁴、10⁵倍的稀釋液和無菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上
D．在皿蓋上用記號筆做標記
（3）在培養(yǎng)時，需將培養(yǎng)皿倒置并放在恒溫培養(yǎng)箱中，否則將可能導(dǎo)致無法形成單一菌落．
（4）臨床上¹⁴C呼氣試驗檢測是一種安全、準確的檢測Hp的方法，其基本原理是當被檢測者服用含有¹⁴C標記尿素的膠囊后，如患者的胃內(nèi)存在Hp感染，則可將其分解為氨和¹⁴CO₂．

Answer 1

分析 1、接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法．接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個細胞．
2、微生物的營養(yǎng)物質(zhì)有5類，分別是水、無機鹽、碳源、氮源及生長因子．
3、由于細菌分解在尿素的過程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會使培養(yǎng)基堿性增強，PH升高，所以可以用檢測pH的變化的方法來判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，PH升高，指示劑變紅．

解答 解：（1）由于尿素分解細菌能合成脲酶，脲酶能將尿素分解成氨，而氨會使培養(yǎng)基堿性增強，即pH升高，導(dǎo)致酚紅指示劑變紅．
（2）①微生物接種的方法很多，但都要注意防止雜菌的污染；接種微生物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，圖示所示為稀釋涂布平板法．
②圖示每次取樣前需用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，目的是使微生物和無菌水混合均勻．
③A．高壓滅菌加熱結(jié)束，等待壓力表指針回到零后，才能開啟鍋蓋，不能打開放氣閥使壓力表指針回到零，A錯誤；
B．含酚紅指示劑的尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基滅菌后，冷卻至50℃左右倒平板，不需要冷卻到室溫，B錯誤；
C．取10³、10⁴、10⁵倍的稀釋液和無菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上，C正確；
D．用記號筆標記培養(yǎng)皿中菌落時，應(yīng)標記在皿底上，D錯誤．
故選：C．
（3）培養(yǎng)時需將培養(yǎng)皿倒置并放在恒溫箱中培養(yǎng)，倒置培養(yǎng)的目的也是為了獲得單一菌落．
（4）如果人體感染了Hp，能將尿素分解為NH₃和CO₂，因而標記尿素中的C，可通過呼吸產(chǎn)物來判斷是否感染Hp．
故答案為：
（1）尿素酶　  紅
（2）①防止雜菌的污染    稀釋涂布平板法           ②使微生物和無菌水混合均勻         ③C
（3）倒置　  無法形成單一菌落
（4）¹⁴C標記尿素

點評 本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)的有關(guān)知識，要求考生掌握菌種分離與純化的方法和步驟，微生物的實驗室分離是選修一的重點內(nèi)容，考生需重點掌握教材的基礎(chǔ)知識點，注意歸納總結(jié)．