Question

下圖為某種質(zhì)粒表達(dá)載體簡圖，小箭頭所指分別為限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位點，ampR為青霉素抗性基因。tetR為四環(huán)素抗性基因，P為啟動子，T為終止子，ori為復(fù)制原點。已知目的基因的兩端分別有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在內(nèi)的多種酶的酶切位點。據(jù)圖回答：

(1)將含有目的基因的DNA與質(zhì)粒表達(dá)載體分別用EcoRⅠ酶切，酶切產(chǎn)物用DNA連接酶進行連接后，其中由兩個DNA片段之間連接形成的產(chǎn)物有________、_______、_______三種。若要從這些連接產(chǎn)物中分離出重組質(zhì)粒，需要對這些連接產(chǎn)物進行___________。
(2)用上述3種連接產(chǎn)物與無任何抗藥性的原核宿主細(xì)胞進行轉(zhuǎn)化實驗。之后將這些宿主細(xì)胞接種到含四環(huán)素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物是________；若接種到含青霉素的培養(yǎng)基中，能生長的原核宿主細(xì)胞所含有的連接產(chǎn)物有___________。
(3)目的基因表達(dá)時，RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點是，其合成的產(chǎn)物是_____________。
(4)在上述實驗中，為了防止目的基因和質(zhì)粒表達(dá)載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，酶切時應(yīng)選用的酶是________________。

Answer 1

(1)目的基因和載體連接物    載體和載體連接物   目的基因和目的基因連接物    分離、純化(或篩選)
(2)載體和載體連接物    目的基因和載體連接物、載體和載體連接物
(3)啟動子    mRNA
(4)EcoRⅠ和BamHⅠ