Question

【題目】嗜熱鏈球菌屬于一種乳酸菌。分離出優(yōu)質的嗜熱鏈球菌是酸奶工業(yè)中的關鍵環(huán)節(jié)，以下是嗜熱鏈球菌的有關分離純化與鑒定過程，請回答相關問題。

第一步：從國家乳業(yè)技術中心獲得混合發(fā)酵劑（含多種乳酸菌），用無菌生理鹽水梯度稀釋。

第二步：取等量不同稀釋度的菌液分別接種于Elliker培養(yǎng)基，在相同且適宜條件下培養(yǎng)。

第三步：選取疑似菌落分別穿刺接種于ABC三種糖發(fā)酵半固體培養(yǎng)基（成分及現(xiàn)象如下表）中培養(yǎng)，進一步進行生化鑒定。

成分（g）	胰蛋白胨	牛肉膏	葡萄糖	蔗糖	麥芽糖	溴甲酚紫	NaCl	瓊脂	現(xiàn)象
A培養(yǎng)基	10	3.0	5.0	無	無	0.04	5.0	5.0	紫色變?yōu)辄S色
B培養(yǎng)基			無	5.0	無				紫色變?yōu)辄S色
C培養(yǎng)基			無	無	5.0				不變色
說明	1.溴甲酚紫是一種酸堿指示劑，在中性時為紫色，堿性時為深紅色，而在酸性時呈現(xiàn)黃色。 2.將上述成分溶解，pH調為7，用蒸餾水定容至1000mL；

第四步：將生化鑒定為嗜熱鏈球菌的疑似菌落進行擴大培養(yǎng)并保存。

（1）第一步中稀釋的目的是______________________。

（2）在第二步中，利用的接種方法是____________，可根據(jù)菌落__________特征來選取疑似菌落。（寫出兩點）

（3）第三步中，如果接種的疑似菌落確實是嗜熱鏈球菌，根據(jù)生化鑒定現(xiàn)象歸納其代謝特點為：利用___（葡萄糖/蔗糖/麥芽糖）作為主要碳源，并可以經(jīng)_____（無氧/有氧）呼吸的方式分解底物，且在代謝產(chǎn)物中一定有____（酸/堿/中）性產(chǎn)物產(chǎn)生。NaCl的主要作用是_________。

（4）第四步中，如果要長期保存分離出的菌種常采用___________________的方法，并將其置于_____ ℃ 冷凍箱中保存。

Answer 1

【答案】便于形成單菌落，利于微生物的分離純化(將細胞分散，便于形成單菌落） 稀釋涂布平板法 形狀、大小、隆起程度、顏色、凸起等 葡萄糖和蔗糖 無氧 酸 維持正常的滲透壓、提供無機鹽 甘油管藏 -20

【解析】

本題涉及微生物的培養(yǎng)與分離，考查對培養(yǎng)基成分、接種方法、菌種保存方法的理解和識記。乳酸菌在代謝中可產(chǎn)生乳酸，使培養(yǎng)基表現(xiàn)為酸性，結合表中實驗結果可判斷嗜熱鏈球菌的主要碳源，根據(jù)穿刺接種方法可判斷其異化作用方式。

（1）第一步中稀釋的目的是降低菌體密度，以便于在固體培養(yǎng)基上形成單菌落，利于微生物的分離純化。

（2）在第二步中，取不同稀釋度的菌液接種，應采用稀釋涂布平板法，不同菌種的菌落形狀、大小、隆起程度、顏色、凸起等特征不同，據(jù)此可選取目的菌的菌落。

（3）第三步中，如果接種的疑似菌落確實是嗜熱鏈球菌，根據(jù)實驗結果可知，培養(yǎng)基中含有葡萄糖或蔗糖時，培養(yǎng)基變?yōu)辄S色，說明嗜熱鏈球菌利用葡萄糖或蔗糖作為主要碳源，且在代謝產(chǎn)物中一定有酸性產(chǎn)物產(chǎn)生；接種時采用穿刺接種，避免菌種接種氧氣，說明嗜熱鏈球菌經(jīng)無氧呼吸的方式分解底物，NaCl作為無機鹽，可以維持培養(yǎng)基正常的滲透壓，維持菌體正常的生命活動。

（4）甘油在菌種冷凍保存時作為保護劑及防凍劑，以防止因冷凍或水分不斷升華對細胞的損害。長期保存分離出菌種常采用甘油管藏的方法，并將其置于-20℃冷凍箱中保存，以降低其代謝速率。

比較項目	平板劃線法	稀釋涂布平板法
關鍵操作	接種環(huán)在固體平板培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線	一系列的梯度稀釋；涂布平板法操作
注意事項	每次劃線前后均需灼燒接種環(huán)	稀釋度需足夠高，為確保實驗成功可以增加稀釋度的范圍
菌體獲取	在具有顯著菌落特征的區(qū)域的菌落中跳去菌體	從適宜稀釋濃度的平板上的菌落中跳去菌體
優(yōu)點	可以根據(jù)菌落特征獲得某種微生物的單細胞菌落	既可以獲得單細胞菌落，又能對微生物進行計數(shù)
缺點	不能對微生物計數(shù)	操作復雜，需要涂布多個平板