Question

【題目】支原體是一種嚴(yán)重危害牛養(yǎng)殖業(yè)的病原體，在全球各地域廣泛分布，能夠造成肺炎、乳腺炎、耳炎、角膜結(jié)膜炎、關(guān)節(jié)炎等多種疾病，還能導(dǎo)致母牛流產(chǎn)與不孕，且發(fā)病率很高。研究表明，VspX蛋白是支原體表面的一種蛋白，科研人員通過制備抗VspX蛋白單克隆抗體來進(jìn)行相關(guān)研究。請(qǐng)回答下列問題：

（1）將等量的純化VspX蛋白分別注射到5組生長狀況相同的小鼠體內(nèi)，經(jīng)過二次免疫后，測(cè)定小鼠抗VspX抗似的免疫效果，根據(jù)免疫效果，取__________組小鼠用于后面的融合實(shí)驗(yàn)。

（2）在融合實(shí)驗(yàn)開始前三天，對(duì)該組小鼠再次注射VspX蛋白，目的是____________________。

（3）從小鼠的脾臟中獲取相應(yīng)細(xì)胞與_______________融合，用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。

（4）一段時(shí)間后，將篩選得到的雜交瘤細(xì)胞接種到多孔培養(yǎng)板上，進(jìn)行抗體陽性檢測(cè)。

（5）將陽性反應(yīng)強(qiáng)的細(xì)胞經(jīng)__________酶處理，制成細(xì)胞懸液，并置于__________（裝置）中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。該裝置中的作用是________________________________________。

（6）提取抗VspX單克隆抗體與不同抗原進(jìn)行雜交檢測(cè)，結(jié)果如圖，該結(jié)果表明，抗VspX單克隆抗體的特點(diǎn)是_____________________。

Answer 1

【答案】免疫效果最好的 刺激機(jī)體產(chǎn)生更多的漿細(xì)胞 骨髓瘤細(xì)胞 胰蛋白 二氧化碳 培養(yǎng)箱維持培養(yǎng)液的pH值 靈敏度高，特異性強(qiáng)

【解析】

單克隆抗體的制備：

（1）制備產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞：向免疫小鼠體內(nèi)注射特定的抗原，然后從小鼠脾內(nèi)獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞。

（2）獲得雜交瘤細(xì)胞

①將鼠的骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞中形成的B淋巴細(xì)胞融合；

②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，該雜種細(xì)胞既能夠增殖又能產(chǎn)生抗體。

（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)；

（4）將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖；

（5）提取單克隆抗體：從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提��；

（6）單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，能大量制備。

（1）VspX蛋白作為抗原注射到小鼠體內(nèi)，使小鼠產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答。要選取免疫效果最強(qiáng)的組別用于后續(xù)融合實(shí)驗(yàn)。

（2）為了使刺激機(jī)體產(chǎn)生更多的漿細(xì)胞，對(duì)該組小鼠再次注射抗原，加強(qiáng)免疫。

（3）用PEG（聚乙二醇）使小鼠的脾臟細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，再通過選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選得到雜交瘤細(xì)胞。

（5）加入胰蛋白酶使細(xì)胞分散開，制成細(xì)胞懸液，培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，要置于二氧化碳培養(yǎng)箱中，該裝置中的CO2是為了維持培養(yǎng)液的pH值。

（6）實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，抗VspX單克隆抗體與1、2結(jié)合明顯，不能與3、4結(jié)合，具有很強(qiáng)的靈敏度和特異性。