Question

【題目】（1）紅細胞含有大量血紅蛋白，紅細胞的機能主要是由血紅蛋白完成。我們可以選用豬、牛、羊等動物的血液進行實驗，來提取和分離血紅蛋白，請回答下列有關問題：

①實驗前取新鮮的血液，要切記在采血容器中預先加入_______以防止血液凝固，取血回來，馬上進行離心，收集血紅蛋白溶液。此過程是樣品處理，在獲取紅細胞內的血紅蛋白時，較簡便的辦法是_________，然后再分離血紅蛋白溶液。

②收集到的血紅蛋白溶液在透析袋中透析，透析的目的是________。

③透析結束后，需將得到的樣品通過 ____法進一步的純化，最后可經 ____________凝膠電泳法進行純度鑒定。

（2）在固定化酵母細胞時，通常采用 _________法，加熱溶解海藻酸鈉時需注意_______加熱，溶化好的海藻酸鈉溶液應冷卻至室溫后再與已活化的酵母細胞充分混合。

Answer 1

【答案】檸檬酸鈉（或抗凝劑） 紅細胞吸水漲破 去除相對分子質量較小的雜質 凝膠色譜 SDS—聚丙烯酰胺 包埋 小火（或間斷）

【解析】

血紅蛋白的提取與分離的實驗步驟主要有：

（1）樣品處理：①紅細胞的洗滌，②血紅蛋白的釋放，③分離血紅蛋白。
（2）粗分離：①分離血紅蛋白溶液，②透析。
（3）純化：調節(jié)緩沖液面→加入蛋白質樣品→調節(jié)緩沖液面→洗脫→收集分裝蛋白質。
（4）純度鑒定--SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。

（1）①采取血液時要在采血容器中預先加入檸檬酸鈉以防止血液凝固。在獲取紅細胞內的血紅蛋白時，較簡便的辦法是將紅細胞置于蒸餾水中利用滲透原理使紅細胞吸水漲破，然后再分離血紅蛋白溶液。

②收集到的血紅蛋白溶液在透析袋中透析，由于透析的原理是透析袋能使小分子自由進出，而大分子則保留在袋內，所以透析的目的是去除相對分子質量較小的雜質。

③樣品的純化是通過膠色譜法將相對分子質量大的雜質蛋白除去。最后可經SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳法進行純度鑒定。

（2）酵母細胞個大，難以被吸附或結合，所以在固定化酵母細胞時，通常采用包埋法。加熱溶解海藻酸鈉時需注意小火（或間斷）加熱，溶化好的海藻酸鈉溶液應冷卻至室溫后再與已活化的酵母細胞充分混合。