Question

2．如表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中標注了質粒和目的基因中相關限制酶的酶切位點，其中切割位點相同的酶不重復標注．請回答下列問題：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
識別序列及切割位點

（1）質粒載體作為基因工程的工具，應具有的基本條件有具有標記基因、具有一個或多個限制酶切點、能在受體細胞中復制并穩(wěn)定保存（答出兩點即可），而作為基因表達載體，除了滿足上述基本條件外，還需具有啟動子和終止子．
（2）根據表格分析，經BamHⅠ酶切后得到的DNA片段不可以（“可以”或“不可以”）與經HindⅢ酶切后的產物連接，理由是產生的粘性末端不同．
（3）用圖中質粒和目的基因構建重組質粒，應選用兩種限制酶切割，即BelⅠ酶和HindⅢ．酶切后的載體和目的基因片段，通過DNA連接酶酶作用后獲得重組質粒．為了擴增重組質粒，需將其轉入處于感受態(tài)的大腸桿菌．
（4）轉入了重組質粒的大腸桿菌可在添加了四環(huán)素的培養(yǎng)基表面長出菌落．若用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中引物甲和引物丙．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
1、目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
3、將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
4、目的基因的檢測與鑒定：
（1）分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．
（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）質粒載體作為基因工程的工具，應具備的基本條件有具有標記基因、具有一個或多個限制酶切點、能在受體細胞中復制并穩(wěn)定保存．
（2）根據表格分析，經BamHⅠ酶切后得到的DNA片段不可以與經HindⅢ酶切后的產物連接，理由是產生的粘性末端不同．
（3）選擇的限制酶應在目的基因兩端存在識別位點，但BamHⅠ可能使質粒中的啟動子丟失，因此只能選BelI和HindⅢ兩種限制酶切割．酶切后的載體和目的基因片段，通過連接酶作用后獲得重組質粒．為了擴增重組質粒，需將其轉入處于感受態(tài)的大腸桿菌．
（4）為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，根據質粒上的抗性基因，應在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素．PCR技術要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結合，沿相反的方向合成子鏈，故所用的引物組成為圖2中引物甲和引物丙．
故答案為：
（1）具有標記基因、具有一個或多個限制酶切點、能在受體細胞中復制并穩(wěn)定保存
（2）不可以  產生的粘性末端不同
（3）HindⅢDNA連接酶  感受
（4）四環(huán)素  引物甲和引物丙

點評 本題考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟的相關細節(jié)，能結合所學的知識準確答題，屬于考綱應用和理解層次的考查．