Question

【題目】家蠶細胞具有高效表達外源基因的能力。將人干擾素基因導入家蠶細胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可提取干擾素用于制藥。

（1）進行轉基因操作前，需用__________________酶短時處理幼蠶組織，以便獲得單個細胞作為受體細胞。

（2）若需在短時間內獲得較多的外源基因，通常采用________技術。該技術的反應體系的主要成分應包含：引物、模板DNA、_______________和____________。其反應過程中引物與模板DNA鏈結合依靠___________________________原則完成。

（3）為使干擾素基因在家蠶細胞中高效表達，需要把來自基因文庫的干擾素基因片段正確插入表達載體的__________和__________之間。

（4）檢測人干擾素基因是否已整合到了家蠶細胞的染色體上，可采用_____________________技術。

（5）利用動物細胞培養(yǎng)技術培養(yǎng)家蠶細胞時，貼壁分裂增殖的細胞會表現(xiàn)出__________________現(xiàn)象，進而停止分裂增殖。此時，瓶壁上形成的細胞層數(shù)是________________。

Answer 1

【答案】 胰蛋白酶（或膠原蛋白酶） PCR（或多聚酶鏈式反應） 熱穩(wěn)定DNA聚合酶（或Taq酶） 4種脫氧核苷酸 堿基互補配對 啟動子 終止子 DNA分子雜交 接觸抑制 1層（或單層）

【解析】本題考查動物細胞培養(yǎng)技術和基因工程的知識，要求考生能把握動物細胞培養(yǎng)的原理和操作要點，理解基因工程的基本操作程序，把握每一步操作的要點及依據(jù)，分析基因過程原理在具體實踐中的應用，本題具有一定的綜合性，但難度一般。

（1）進行轉基因操作前，可通過動物細胞培養(yǎng)技術，用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）酶短時處理幼蠶組織，獲得單個細胞為基因工程提供受體細胞。

（2）若需在短時間內獲得較多的外源基因，通常采用PCR（或多聚酶鏈式反應）技術；該技術的反應體系的主要成分應包含引物、模板DNA、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（或Taq酶）和4種脫氧核苷酸；其反應過程中引物與模板DNA鏈結合依靠堿基互補配對原則完成。

（3）該基因工程中，構建基因表達載體時，需要把來自基因文庫的干擾素基因片段正確插入表達載體的啟動子和終止子之間，才能使干擾素基因在家蠶細胞中高效表達。

（4）檢測人干擾素基因是否已整合到了家蠶細胞的染色體上，可采用DNA分子雜交技術，若檢測出雜交帶，則表明目的基因已經成功導入受體細胞。

（5）利用動物細胞培養(yǎng)技術培養(yǎng)家蠶細胞時，貼壁分裂增殖的細胞增值到一定數(shù)量，會表現(xiàn)出接觸抑制現(xiàn)象，進而停止分裂增殖，此時瓶壁上形成的細胞層數(shù)是1層（或單層）。