Question

在培育轉(zhuǎn)基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作為標(biāo)記基因，只有含卡那霉素抗性基因的細(xì)胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長．如圖為獲得抗蟲棉的技術(shù)流程．

請據(jù)圖回答：
（1）A過程需要的酶有

 

、

 

．
（2）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌前，需要用

 

處理土壤農(nóng)桿菌．
（3）B過程的培養(yǎng)基除含有必要營養(yǎng)物質(zhì)、瓊脂和激素外，還必須加入

 

；C過程的名稱是

 

．
（4）如果利用DNA分子雜交原理對再生植株進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)植株中具有抗蟲基因，是否可以說轉(zhuǎn)基因抗蟲植株培育獲得成功？

 

，請說明理由．

 

．
（5）整個(gè)過程應(yīng)用的主要生物技術(shù)是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：根據(jù)題意和圖示分析可知：首先采用基因工程技術(shù)將抗蟲基因?qū)�入離體棉花葉片組織，其過程為：獲取目的基因（抗蟲基因）→構(gòu)建基因表達(dá)載體→將目的基因?qū)�入農(nóng)桿菌→用含有卡那霉素的選擇培養(yǎng)基篩選含有重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌→利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入離體棉花葉片組織細(xì)胞．
其次采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，將導(dǎo)入抗蟲基因的細(xì)胞培養(yǎng)成轉(zhuǎn)基因抗蟲植株，其過程主要包括脫分化和再分化兩個(gè)步驟．
圖中A表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，B表示用選擇培養(yǎng)基篩選含有重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌的過程，C表示脫分化過程，D表示個(gè)體水平上的檢測．

解答： 解：（1）基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程：首先用同一種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，然后再用DNA連接酶把目的基因和運(yùn)載體質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒．
（2）將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞常采用感受態(tài)細(xì)胞法，即用Ca²⁺處理微生物細(xì)胞，使之成為易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)．
（3）C過程為誘導(dǎo)選擇，既要誘導(dǎo)出愈傷組織還要進(jìn)行篩選，篩選出被含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌侵染的葉片細(xì)胞，淘汰掉普通細(xì)胞，故應(yīng)添加卡那霉素．C過程的名稱是脫分化，形成愈傷組織．
（4）如果利用DNA分子雜交原理對再生植株進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)植株中具有抗蟲基因，這說明抗蟲基因已經(jīng)成功導(dǎo)入受體細(xì)胞，但不能看出抗蟲基因是否表達(dá)，因此不能說轉(zhuǎn)基因抗蟲植株培育獲得成功．
（5）整個(gè)過程應(yīng)用的主要生物技術(shù)是基因工程、植物組織培養(yǎng)．
故答案為：
（1）限制性內(nèi)切酶        DNA連接酶        
（2）CaCl₂
（3）卡那霉素    脫分化    
（4）不可以   要看抗蟲基因在植株中是否表達(dá)
（5）基因工程、植物組織培養(yǎng)

點(diǎn)評：本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因抗蟲植株的培育過程圖，考查基因工程和植物組織培養(yǎng)的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的工具及操作步驟，能準(zhǔn)確判斷圖中各過程的名稱，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題．