Question

14．繼哺乳動物乳腺發(fā)生器研發(fā)成功后，膀胱生物發(fā)生器的研究也取得了一定進展．最近，科學家培養(yǎng)出一種轉基因小鼠，其膀胱上皮細胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中．請回答：
（1）基因工程的核心步驟是基因表達載體的構建．
（2）進行基因轉移時，通常要將外源基因導入受精卵（早期胚胎）（細胞）中．
（3）通常采用DNA分子雜交技術檢測外源基因是否插入了小鼠的基因組．
（4）在研制膀胱生物反應器時，應使外源基因在小鼠的膀胱上皮細胞中特異表達．
（5）載體經(jīng)EcoRI（一種限制性核酸內切酶）切割后所形成的黏性末端之一是，則EcoRI的識別序列和切點是-G↓GATCC-（切點用箭頭標在序列上）．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）基因工程的核心步驟是基因表達載體的構建．
（2）由于受精卵（或早期胚胎細胞）具有全能性，可使外源基因在相應組織細胞表達，因此進行基因轉移時，通常要將外源基因轉入受精卵（或早期胚胎）中．
（3）檢測外源基因是否插入了小鼠的基因組通常采用DNA分子雜交技術．
（4）在研制膀胱生物反應器時，應在目的基因前加入膀胱組織特異性表達的啟動子，使外源基因在小鼠的膀胱上皮細胞中特異表達．
（5）經(jīng)EcoRI切割后所形成的黏性末端之一是，則EcoRI的識別序列和切點是-G↓GATCC-．
故答案為：
（1）基因表達載體的構建     
（2）受精卵（早期胚胎）
（3）DNA分子雜交     
（4）膀胱上皮    
（5）-G↓GATCC-

點評 本題綜合考查基因工程技術方面的知識，要求考生識記基因工程的原理、操作步驟及應用；識記目的基因檢測與鑒定的方法；明確動物受體細胞運用顯微注射法，并能結合所學的知識準確答題．