Question

【題目】基因工程的第一步是獲取目的基因。某科研工作者欲將人的胰島素基因導入大腸桿菌，從而去獲取更多的胰島素。該科研工作者先從人體胰島B細胞中獲取胰島素mRNA，然后再通過_______________過程去獲得胰島素基因即目的基因。

（1）基因工程的第二步是將目的基因和運載體進行重組。此時，需要選擇合適的限制酶和_______酶。常用的運載體是細菌質粒（如圖所示），質粒中ori為質粒復制所必需的DNA序列，啟動子是使轉錄開始的一段DNA序列，終止子是提供轉錄終止信號的DNA序列。青霉素抗性基因作為__________基因，以便于篩選。質粒上還有多種限制酶的切點，若目的基因上也有相應限制酶切點，為避免自身環(huán)化并確保目的基因與圖中質粒準確重組，可選用的限制酶是_____。

A. NdeI和XbaI B．NdeI和BamHI

C．XbaI D．PstI E．BamHI

Answer 1

【答案】逆轉錄 DNA連接 標記 B

【解析】

基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。
（3）將目的基因導入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

基因工程的第一步是獲取目的基因，獲取的方法包括從某種生物體細胞中分離和化學方法人工合成。獲取人的胰島素基因，反轉錄法的做法是從人體胰島B細胞中獲取胰島素mRNA，再通過逆轉錄過程獲取目的基因。

（1）將目的基因和運載體重組時需要選擇合適的限制酶和DNA連接酶，以保留ori、啟動子、終止子，同時保留青霉素抗性基因作為標記基因，以便于篩選。為避免目的基因自身的環(huán)化并能與圖中質粒準確重組，應選用兩種不同的限制酶，可選用的限制酶是NdeI和BamHI，選擇NdeI和XbaI會導致終止子被切除。B正確。