Question

8．胡蘿卜素作為一種重要的天然色素在人們的日常生活中有著廣泛的應(yīng)用，在胡蘿卜素的多種生產(chǎn)方式中，使用三孢布拉氏霉菌進行發(fā)酵生產(chǎn)的方法，以及產(chǎn)品的高純度、無毒副作用及綠色環(huán)保等優(yōu)點受到人們的廣泛重視．請回答下列問題：
（1）用平板劃線法純化三孢布拉氏霉菌，通常使用的劃線工具是接種環(huán)，其滅菌方法是灼燒滅菌．劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷的長滿了菌，第二劃線區(qū)域的第一條線上無菌落，其它劃線上有菌落．造成劃線無菌落可能的操作失誤有接種環(huán)灼燒后未冷卻或劃線未從第一區(qū)域末端開始．
（2）常用稀釋涂布平板法法進行活菌計數(shù)，但統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌實際數(shù)目低．
（3）不同的材料選用的提取方法不同，根據(jù)胡蘿卜素具有易溶于有機溶劑的特點．常用萃取法提取胡蘿卜素．提取胡蘿卜素時，干燥過程應(yīng)控制好溫度和時間以防止胡蘿卜素分解．
（4）提取的胡蘿卜素樣品通過紙層析法法進行鑒定，確定是否提取到胡蘿卜素．

Answer 1

分析 1、胡蘿卜素的提取：
（1）胡蘿卜素的性質(zhì)：胡蘿卜素是橘黃色結(jié)晶，化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有機溶劑．
（2）胡蘿卜素的提取來源
提取天然胡蘿卜素的方法主要有：一是從植物中提�。欢�是從大面積養(yǎng)殖的巖藻中獲得；三是利用微生物的發(fā)酵生產(chǎn)．
（3）萃取劑：最適宜作胡蘿卜素萃取劑的是石油醚．
（4）實驗流程
胡蘿卜→粉碎→干燥→萃取（石油醚）→過濾_→濃縮→胡蘿卜素→鑒定（紙層析法）．
2、平板劃線操作的注意事項
①第一次劃線及每次劃線之前都需要灼燒接種環(huán)滅菌；
②灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種；
③劃線時最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連；
④劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破．

解答 解：（1）用平板劃線法純化三孢布拉氏霉菌，通常使用的劃線工具是接種環(huán)，金屬用具的滅菌方法一般采用灼燒滅菌．接種環(huán)灼燒后未冷卻或劃線未從第一區(qū)域末端開始，可能導(dǎo)致劃線的某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域的劃線上都不間斷的長滿了菌，第二劃線區(qū)域的第一條線上無菌落，其它劃線上有菌落．
（2）常用稀釋涂布平板法法進行活菌計數(shù)，但統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌實際數(shù)目低．
（3）不同的材料選用的提取方法不同，根據(jù)胡蘿卜素具有易溶于有機溶劑的特點．常用萃取法提取胡蘿卜素．提取胡蘿卜素時，干燥過程應(yīng)控制好溫度和時間以防止胡蘿卜素分解．
（4）提取的胡蘿卜素樣品通過紙層析法法進行鑒定，確定是否提取到胡蘿卜素．
故答案為：
（1）接種環(huán)      灼燒滅菌
接種環(huán)灼燒后未冷卻或劃線未從第一區(qū)域末端開始（答對一個即得分）
（2）稀釋涂布平板法
（3）易溶于有機溶劑    萃取      時間
（4）紙層析法

點評 本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)以及胡蘿卜素的提取實驗，要求考生能夠掌握無菌技術(shù)的主要內(nèi)容，掌握平板劃線法的相關(guān)操作注意點，識記胡蘿卜素的提取的原理和方法等．