Question

7．鐵皮石斛是一種名貴中藥材，有生津養(yǎng)胃、降血糖和增強免疫力等作用，有效成分為石斛多糖、石斛堿等，溫州雁蕩山素有“中國鐵皮石斛之鄉(xiāng)”的美譽．請回答：
（1）用優(yōu)良品種自然生長的莖快速繁殖鐵皮石斛時，給莖消毒時無需使用的是C （A．乙醇B．無菌水 C．甘露醇 D．次氯酸鈉）．在細胞分裂素相對較多和生長素相對較少的培養(yǎng)基中培養(yǎng)莖的切段，待長出較多的叢壯苗，將其進行分株∕分株培養(yǎng)（處理）后再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，直至長成幼苗．這種通過組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖植物的方法，也稱為植物克�。�
（2）研究發(fā)現(xiàn)，鐵皮石斛的生長發(fā)育與其體內(nèi)的內(nèi)生菌密切相關．為進一步研究內(nèi)生菌作用，需要大量內(nèi)生菌進行相關實驗．分離內(nèi)生菌時最好采用D （A．G6玻璃砂漏斗過濾法 B．血細胞計數(shù)法 C．劃線分離法 D．涂布分離法），再將純化的內(nèi)生菌轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)．
（3）研究發(fā)現(xiàn)，200mg/L濃度的卡那毒素能有效抑制鐵皮石斛細胞的增殖與分化．科學家欲利用卡那霉素，采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法對現(xiàn)有鐵皮石斛品種進行基因改良．在基因工程操作中，導入受體細胞的重組DNA∕重組質(zhì)粒分子應同時帶有目的基因和卡那霉素抗性∕抗卡那霉素基因，這樣才能利用含有卡那霉素的培養(yǎng)基將成功導入目的基因的受體細胞篩選出來．
（4）鑒定鐵皮石斛的品質(zhì)，可通過苯酚-濃硫酸法測定石斛多糖的含量．其原理是：石斛多糖水解成單糖并脫水生成糖醛衍生物后，與苯酚縮合生產(chǎn)橙黃色化合物，在490mm處測定光密度值，以不同濃度的葡萄糖溶液為標準溶液建立標準曲線，便可知道樣品的石斛多糖含量．這種方法類似于泡菜汁中亞硝酸鹽含量的測定，稱之為光電比色法．
（5）為高效提取石斛多糖，可在提取液中加入果膠酶∕果膠酶和果膠甲酯酶∕果膠酶和纖維素酶∕果膠酶、果膠甲酯酶和纖維素酶，以提高鐵皮石斛的出汁率．

Answer 1

分析 1、在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應后，與N1萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料．將顯色反應后的樣品與已知濃度的標準液進行目測對比，可以大致估算出亞硝酸鹽的含量．
2、基因表達載體的構(gòu)建組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因．目的：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用．
3、外植體用體積分數(shù)為70%的酒精浸泡30s→無菌水沖洗→吸干表面的水分，放入質(zhì)量分數(shù)為0.1%的氯化汞和1%的次氯酸鈣溶液中2～4min→無菌水再沖洗3～5次．

解答 解：（1）適宜濃度甘露醇能維持細胞內(nèi)外的滲透壓，防止細胞吸水脹破，因此給莖消毒時無需使用甘露醇．在細胞分裂素相對較多和生長素相對較少的培養(yǎng)基中培養(yǎng)莖的切段，利于芽的分化，待長出較多叢壯苗，將其進行分株∕分株培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，直至長成幼苗．這種通過組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖植物的方法，也稱為植物克隆．
（2）分離內(nèi)生菌時最好采用涂布分離法，再將純化的內(nèi)生菌轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中進行擴大培養(yǎng)．
（3）在基因工程操作中，導入受體細胞的基因表達載體（重組DNA∕重組質(zhì)粒）分子組成有目的基因、標記基因（卡那霉素抗性∕抗卡那霉素基因）、啟動子、終止子、復制原點．由于受體細胞中含有卡那霉素抗性∕抗卡那霉素基因的標記基因，所以利用含有卡那霉素的培養(yǎng)基將成功導入目的基因的受體細胞篩選出來．
（4）石斛多糖水解成單糖并脫水生成糖醛衍生物后，與苯酚縮合生產(chǎn)橙黃色化合物，在490mm處測定光密度值，以不同濃度的葡萄糖溶液為標準溶液建立標準曲線，便可知道樣品的石斛多糖含量．這種方法類似于泡菜汁中亞硝酸鹽含量的測定，稱之為光電比色法．
（5）加入果膠酶和纖維素酶，破壞細胞壁，有利于提高鐵皮石斛的出汁率．
故答案為：
（1）C   叢壯苗   分株∕分株培養(yǎng)   生根   植物克隆
（2）D  擴大培養(yǎng)
（3）重組DNA∕重組質(zhì)粒   卡那霉素抗性∕抗卡那霉素
（4）亞硝酸鹽   光電比色
（5）果膠酶∕果膠酶和果膠甲酯酶∕果膠酶和纖維素酶∕果膠酶、果膠甲酯酶和纖維素酶

點評 本題考查基因工程、植物組織培養(yǎng)、泡菜的制作及亞硝酸鹽含量的測定的相關知識，意在考查考生的識記能力和理解所學知識要點，把握知識間內(nèi)在聯(lián)系，形成知識網(wǎng)絡結(jié)構(gòu)的能力；能運用所學知識，準確判斷問題的能力，屬于考綱識記和理解層次的考查