Question

【題目】尿素是一種重要的氮肥，農(nóng)作物不能將其直接吸收利用，而是通過土壤中的細(xì)菌將其分解為氮和CO2后才能被農(nóng)作物利用。請(qǐng)回答下列問題：

（1）土壤中的某些細(xì)菌能分解尿素是因?yàn)樵摲N細(xì)菌能合成____________。

（2）為篩選尿素分解而制備的培養(yǎng)基中含有的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)除尿素外還包括水、碳源____________等，該培養(yǎng)基能篩選出目的菌株的原因是________________________。

（3）一般依據(jù)尿素分解菌菌落的____________、隆起程度和顏色等特征來統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目�，F(xiàn)將10mL尿素分解菌懸液進(jìn)行梯度稀釋，分別取0.1mL稀釋倍數(shù)為106的樣液接種到3個(gè)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)分別為39、42、45，則1mL懸液中活細(xì)菌數(shù)量為____________個(gè)。上述過程采用的接種方法是________________________。

（4）為檢驗(yàn)培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿滅菌是否合格，可采取的措施是________________________。

【答案】 脲酶 無機(jī)鹽 只有以尿素作為唯一氮源的細(xì)菌才能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng) 形態(tài)、大小 4.2×108 稀釋涂布平板法 單獨(dú)設(shè)置一個(gè)滅菌后不接種樣液的培養(yǎng)皿（含培養(yǎng)基）進(jìn)行培養(yǎng)

【解析】本題考查分解尿素的微生物的培養(yǎng)與計(jì)數(shù)，要求考生理解脲酶的作用，能配制合適的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌并進(jìn)行計(jì)數(shù)。

（1）脲酶能催化尿素分解為氨氣和二氧化碳，土壤中的某些細(xì)菌能分解尿素是因?yàn)樵摲N細(xì)菌能合成脲酶。

（2）為篩選尿素分解而制備的培養(yǎng)基中含有的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)除尿素外還包括水、碳源、無機(jī)鹽等，該培養(yǎng)基能篩選出目的菌株的原因是只有以尿素作為唯一氮源的細(xì)菌才能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。

（3）一般依據(jù)尿素分解菌菌落的形態(tài)、大小、隆起程度和顏色等特征來統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目�，F(xiàn)將10mL尿素分解菌懸液進(jìn)行梯度稀釋，分別取0.1mL稀釋倍數(shù)為106的樣液接種到3個(gè)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)分別為39、42、45，則1mL懸液中活細(xì)菌數(shù)量為（39+42+45）30.1×106=4.2×108個(gè)；上述過程采用的接種方法是稀釋涂布平板法。

（4）為檢驗(yàn)培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿滅菌是否合格，可單獨(dú)設(shè)置一個(gè)滅菌后不接種樣液的培養(yǎng)皿（含培養(yǎng)基）進(jìn)行培養(yǎng)，若該培養(yǎng)皿中沒有出現(xiàn)菌落，則說明該培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿滅菌合格。

【點(diǎn)睛】易錯(cuò)知識(shí)點(diǎn)撥:

1)土壤中分解尿素的細(xì)菌篩選原理

①選擇培養(yǎng)基的成分：尿素作為唯一的氮源

②鑒定方法：在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若pH升高，指示劑變紅，說明細(xì)菌能分解尿素

2）微生物數(shù)量統(tǒng)計(jì)方法：

(1)直接計(jì)數(shù)法(顯微鏡下用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板)

(2)間接計(jì)數(shù)法：稀釋涂布平板法

3）兩種純化細(xì)菌的方法的比較：

項(xiàng)目	優(yōu)點(diǎn)	缺點(diǎn)	適用范圍
平板劃線法	可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離	不能計(jì)數(shù)	適用于好氧菌
稀釋涂布平板法	可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征	吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延	適用于厭氧菌和兼性厭氧菌

【題型】非選擇題
【結(jié)束】
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【題目】干擾素是動(dòng)物或人體細(xì)胞受到病毒感染后產(chǎn)生的一種糖蛋白，具有抗病毒、抑制細(xì)胞增殖及抗腫瘤的作用。 培育轉(zhuǎn)干擾素基因馬鈴薯植株的大致流程如圖所示。請(qǐng)回答下列問題：

（1）過程①中剪切質(zhì)粒和目的基因時(shí)所需要的工具酶是_____________。

（2）過程②中將重組質(zhì)粒導(dǎo)入根瘤農(nóng)桿菌時(shí)，常用_____________處理根瘤農(nóng)桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞，最終使干擾素基因插入馬鈴薯細(xì)胞的_____________上。

（3）圖中過程③和過程④合稱為_____________技術(shù)，該技術(shù)能體現(xiàn)細(xì)胞的_____________。

（4）在分子水平上檢測(cè)轉(zhuǎn)基因是否成功包括三個(gè)方面:________________。

Answer 1

【答案】 PstⅠ、EcoRⅠ Ca2+ 染色體DNA 植物組織培養(yǎng) 全能性 檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA是否插入干擾素基因，檢測(cè)干擾素基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，檢測(cè)干擾素基因是否翻譯出干擾素（或檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA是否插入目的基因，檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，檢測(cè)目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì)）

【解析】試題分析：據(jù)圖分析，①表示構(gòu)建基因表達(dá)載體的過程，②將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的過程，③表示脫分化形成愈傷組織，④表示再分化形成完整植株的過程。根據(jù)干擾素基因上的3個(gè)限制酶切點(diǎn)可知， SmaⅠ切割位點(diǎn)在干擾素基因中間，會(huì)破壞干擾素基因，而干擾素基因和質(zhì)粒上都有PstⅠ、EcoRⅠ切割位點(diǎn)，因此過程①中應(yīng)該選擇PstⅠ、EcoRⅠ切割干擾素基因和質(zhì)粒。

（1）根據(jù)以上分析已知，過程①中剪切質(zhì)粒和目的基因時(shí)所需要的工具酶是PstⅠ、EcoRⅠ。

（2）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入根瘤農(nóng)桿菌時(shí)，應(yīng)該先用鈣離子處理，使之成為感受態(tài)細(xì)胞，便于重組質(zhì)粒的導(dǎo)入，最終使干擾素基因插入馬鈴薯細(xì)胞的染色體DNA上。

（3）植物組織培養(yǎng)過程包括③脫分化和④再分化，該技術(shù)的原理是植物細(xì)胞的全能性。

（4）分子水平上檢測(cè)轉(zhuǎn)基因是否成功包括檢測(cè)目的基因、mRNA和蛋白質(zhì)三個(gè)方面，即檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA是否插入干擾素基因，檢測(cè)干擾素基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，檢測(cè)干擾素基因是否翻譯出干擾素。