Question

3．人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動(dòng)物的胃，可用來(lái)發(fā)酵處理秸稈，提高秸稈的利用價(jià)值．為了增強(qiáng)發(fā)酵效果，研究人員擬從牛胃中篩選出纖維素酶高產(chǎn)菌株，并對(duì)其降解纖維素能力進(jìn)行研究．請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）在樣品稀釋和接種的步驟中，下列選項(xiàng)不需要的是B．
A．酒精燈    B．顯微鏡    C．培養(yǎng)皿    D．無(wú)菌水
（2）為了培養(yǎng)上述菌株，選擇的培養(yǎng)基配方是BCEFG．
A．葡萄糖    B．纖維素    C．氮源    D．纖維素酶    E．瓊脂    F．無(wú)機(jī)鹽    G．蒸餾水
（3）為確定得到的纖維素分解菌，還需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種．
（4）純化微生物培養(yǎng)時(shí)，可采用兩種接種方法．如圖為接種后微生物培養(yǎng)的效果圖，那么獲得圖A效果的接種方法是稀釋涂布平板法，進(jìn)行該操作時(shí)，滴加到培養(yǎng)基表明的菌懸液量不宜過(guò)多的原因是培養(yǎng)基表面的菌懸液會(huì)出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果．圖B效果的接種方法是平板劃線法．

（5）在純化菌種時(shí)，所用的培養(yǎng)基都需要在接種前用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌．將10⁴倍的稀釋液分別涂布到4個(gè)平板上培養(yǎng)，每個(gè)平板均接種了0.1mL樣品．平板的菌落數(shù)分別是210、230、470、190，則樣品中菌種的數(shù)量為2.1×10⁷個(gè)/mL．

Answer 1

分析 1、微生物常見(jiàn)的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．
2、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法
（1）顯微鏡直接計(jì)數(shù)法
 ①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)； ③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌．
（2）間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）
 ①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌．通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌．
②操作
a、設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性．
b、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)．
③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)．

解答 解：（1）為了防止雜菌污染，接種步驟需要在酒精燈的火焰旁進(jìn)行，A錯(cuò)誤；
B、樣品稀釋和接種步驟都不需要使用顯微鏡，B正確；
C、接種步驟中需要用培養(yǎng)皿，C錯(cuò)誤；
D、稀釋時(shí)需要用無(wú)菌水，D錯(cuò)誤，
故選：B．
（2）分離獲得產(chǎn)纖維素酶菌需要使用選擇培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，其中必須添加瓊脂．該培養(yǎng)基應(yīng)該以纖維素（秸桿）作為唯一碳源，因此不需要加葡萄糖，另外還需要加入氮源、無(wú)菌水、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子，故選：BCEFG．
（3）為確定得到的纖維素分解菌，還需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)．
（4）純化微生物培養(yǎng)時(shí)，可采用兩種接種方法，即稀釋涂布平板法和平板劃線法．圖中A采用的稀釋涂布平板法，進(jìn)行該操作時(shí)，滴加到培養(yǎng)基表明的菌懸液量不宜過(guò)多，原因是培養(yǎng)基表面的菌懸液會(huì)出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果．圖B采用的平板劃線法．
（5）對(duì)培養(yǎng)基滅菌常用高壓蒸汽滅菌法．將10⁴倍的稀釋液分別涂布到4個(gè)平板上培養(yǎng)，每個(gè)平板均接種了0.1mL樣品．平板的菌落數(shù)分別是210、230、470、190，為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，則樣品中菌種的數(shù)量為$\frac{210+230+190}{3}$×$\frac{1}{0.1}$×10⁴=2.1×10⁷個(gè)/mL．
故答案為：
（1）B
（2）BCEFG
（3）發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶
（4）稀釋涂布平板法   培養(yǎng)基表面的菌懸液會(huì)出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果   平板劃線法
（5）高壓蒸汽滅菌      2.1×10⁷

點(diǎn)評(píng) 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識(shí)記幾種微生物常用的兩種方法；識(shí)記培養(yǎng)基的組成成分、種類(lèi)及功能；識(shí)記計(jì)數(shù)微生物常用的方法及注意事項(xiàng)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．