Question

【題目】為了獲得較多、較純、較完整的甜菜總DNA，科研人員比較了A方法(通過CTAB裂解細(xì)胞，并與蛋白質(zhì)形成復(fù)合物）、B方法(通過SDS裂解細(xì)胞釋放核DNA，使蛋白質(zhì)變性）、C方法(通過高鹽沉淀蛋白質(zhì))從嫩葉、塊根中提取總DNA的效果，主要實驗步驟和相關(guān)檢測結(jié)果如下，其中氯仿-異戊醇不溶于水且密度均大于水，DNA不溶于氯仿-異戊醇，蛋白質(zhì)等溶于氯仿-異戊醇。分析回答：

結(jié)果檢測

注:①純凈的DNA樣品OD260/OD230值約為2.0，過低表明小分子物質(zhì)殘留較多；②純凈的DNA樣品OD260/OD280值約為1.8，若比值大于1.8表示存在RNA殘留，若小于1.8表示存在蛋白質(zhì)殘留。③得率是指每毫克組織所提取的DNA量。

（1）步驟③將DNA粗提液在65℃水浴保溫60min的目的是_____________。步驟④“? ”表示___________。

步驟⑤中加RNA酶的作用是_______________。

（2）影響DNA純度的物質(zhì)主要有______________。提取的DNA中RNA殘留較多的方法是______________。以嫩葉為材料提取DNA的得率較高，原因是______________。

（3）電泳可以直觀對比DNA的完整性，分子大小不同的DNA在凝膠上遷移速率不同，從而產(chǎn)生不同的條帶。下圖是上述實驗中提取到的總DNA 凝膠電泳結(jié)果，其中M是已知大小的不同DNA的混合物。實驗結(jié)果顯示A、B方法提取的總DNA電泳結(jié)果只有一條帶，而C方法有明顯的“拖尾”現(xiàn)象。

①只出現(xiàn)一條帶的原因是______________。

②出現(xiàn)“拖尾”現(xiàn)象的原因是______________。

Answer 1

【答案】 使蛋白質(zhì)變性 上清液 水解RNA，去除RNA雜質(zhì) 蛋白質(zhì)、RNA、小分子物質(zhì) A方法 細(xì)胞分裂旺盛 甜菜細(xì)胞基因組DNA分子都比較大，不容易分離 DNA發(fā)生斷裂或降解，形成許多大小不等的DNA片段

【解析】試題分析：本題考查DNA的粗提取與鑒定，考查對DNA粗提取方法的理解與識記，考查表格數(shù)據(jù)的分析能力。

（1）65℃水浴保溫60min的目的是使蛋白質(zhì)變性。氯仿-異戊醇不溶于水且密度均大于水，DNA不溶于氯仿-異戊醇，離心后應(yīng)取上清液。步驟⑤中加RNA酶的作用是水解RNA，去除RNA雜質(zhì)。

（2）提取的DNA中可能混有蛋白質(zhì)、RNA、小分子物質(zhì)。A方法提取的DNA OD260/OD280大于1.8，表示RNA殘留較多。嫩葉細(xì)胞分裂旺盛，以嫩葉為材料提取DNA的得率較高。

（3）據(jù)圖可知，DNA分子越大，遷移距離越短。①只出現(xiàn)一條帶的原因是甜菜細(xì)胞基因組DNA分子都比較大，不容易分離。②出現(xiàn)“拖尾”現(xiàn)象的原因是C方法導(dǎo)致DNA發(fā)生斷裂或降解，形成許多大小不等的DNA片段。