Question

8．內(nèi)皮素（ET）是一種含21個氨基酸的多肽．內(nèi)皮素主要通過與靶細胞膜上的內(nèi)皮素受體結合而發(fā)揮生物學效應．ET_A是內(nèi)皮素的主要受體，科研人員試圖通過構建表達載體，實現(xiàn)ET_A基因在細胞中高效表達，為后期ET_A的體外研究奠定基礎．其過程如圖（圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識別序列為-C↓CCGGG-，限制酶XhoⅠ的識別序列為-C↓TCGAG-）．請分析回答下列問題：

（1）完成過程①需要的酶是逆轉錄酶．
（2）過程③中，兩種限制酶在切割DNA時，將磷酸二酯鍵斷開，寫出限制酶XhoⅠ切割形成的一個黏性末端-AGCT（或）．
（3）在滿足條件的情況下，圖過程中③與⑤用兩種限制酶分別切割目的基因與質粒，獲得不同的黏性末端構建表達載體的方法與用同一種限制酶切割構建表達載體相比，其優(yōu)點是使目的基因定向連接到載體上．
（4）過程⑥中，要用Ca²⁺（或CaCl₂）預先處理大腸桿菌，使其轉變?yōu)槟軌蛭�收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細胞．為了將該過程獲得的含重組質粒的大腸桿菌篩選出來，應使用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基．
（5）圖示過程中將SNAP基因與ET_A基因結合構成融合基因，目的是檢測ET_A基因能否表達及表達量．

Answer 1

分析 分析題圖：1、2、3過程表示通過反轉錄法獲得目的基因的過程，4表示基因表達載體的構建過程，5表示利用限制酶切割質粒的過程，6表示將重組質粒導入受體細胞的過程，7表示目的基因的檢測．

解答 解：（1）圖中①是逆轉錄過程，需要逆轉錄酶的催化．
（2）限制酶切割DNA時，切斷的是磷酸二酯鍵；③是利用限制酶XhoⅠ切割DNA獲得目的基因的過程，由于限制酶XhoⅠ的識別序列為C↓TCGAG，因此其切割形成的黏性末端是-AGCT（或）．
（3）圖中顯示利用了兩種限制酶切割目的基因和載體，從而獲得了不同的黏性末端，這種構建基因表達載體的方法與與用同一種限制酶切割構建表達載體相比，可以防止目的基因與運載體反向連接，即可以使目的基因定向連接到載體上．
（4）將目的基因導入微生物細胞常用感受態(tài)轉化法，即用Ca²⁺（或CaCl₂）預先處理大腸桿菌，使其處于容易吸收外界DNA的感受態(tài)．由圖可知，標記基因是氨芐青霉素抗性基因，因此為了將該過程獲得的含重組質粒的大腸桿菌篩選出來，應使用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基．
（5）利用SNAP基因與ET_A基因結合構成融合基因，可以檢測ET_A基因能否表達及表達量．
故答案為：
（1）逆轉錄酶
（2）磷酸二酯-AGCT（或）　  
（3）使目的基因定向連接到載體上
（4）Ca²⁺（或CaCl₂）     感受態(tài)氨芐青霉素
（5）檢測ET_A基因能否表達及表達量

點評 本題結合轉基因香蕉形成的流程圖，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，能結合圖中信息準確答題．