Question

【題目】下圖是培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的技術(shù)路線。圖中tetR表示四環(huán)素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamHⅠ、Hind Ⅲ、SmaⅠ直線所示為三種限制酶的酶切位點(diǎn)。據(jù)圖回答下面的問(wèn)題。

（1）圖中將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用____________（填限制酶的名稱）限制酶同時(shí)酶切載體和人乳鐵蛋白基因；連接酶切產(chǎn)物要用到DNA連接酶，按其來(lái)源不同，可分為兩類，即________DNA連接酶和________DNA連接酶。

（2）理論上講，構(gòu)建載體時(shí)的連接產(chǎn)物可能有____________、____________、____________三種。

（3）篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含________的培養(yǎng)基上進(jìn)行。

（4）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列是_______。

A．啟動(dòng)子 B．tetR C．復(fù)制原點(diǎn) D．a(chǎn)mpR

Answer 1

【答案】 HindIII和BamHI E·coli T4 目的基因—目的基因 載體—載體 目的基因—載體 氨芐青霉素 A

【解析】試題分析：本題以培育表達(dá)人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器為背景，綜合考查了基因工程的原理的知識(shí)。通過(guò)（1）提取圖示載體和人乳鐵蛋白基因結(jié)構(gòu)圖信息，從而判斷出需選擇的限制酶種類；通過(guò)（3）重組載體上含有的氨芐青霉素基因，從而確定培養(yǎng)基上所含有的抗生素種類；其余問(wèn)題比較簡(jiǎn)單，只需按照課本知識(shí)進(jìn)行解答即可。

（1）由圖可知，質(zhì)粒的啟動(dòng)子下游有HindIII和BamHI兩種限制酶的切割位點(diǎn)，人乳鐵蛋白基因的兩端也存在這兩種限制酶的切割位點(diǎn)，所以將人乳鐵蛋白基因插入載體，需用HindIII和BamHI兩種限制酶同時(shí)酶切載體和人乳鐵蛋白基因；DNA連接酶按其來(lái)源不同，可分為兩類，即E·coliDNA連接酶和T4DNA連接酶。

（2）由于HindIII和BamHI兩種限制酶切割目的基因與載體后形成的黏性末端可以互相連接，所以理論上講，構(gòu)建載體時(shí)的連接產(chǎn)物可能有目的基因—目的基因、載體—載體和目的基因—載體三種。

（3）由于重組載體上具有ampR（氨芐青霉素抗性基因），因此首先需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上篩選含有重組載體的大腸桿菌，在該培養(yǎng)基上，含有重組載體的大腸桿菌能夠生存，而不含重組載體的大腸桿菌則會(huì)死亡。

（4）能使人乳鐵蛋白基因在乳腺細(xì)胞中特異性表達(dá)的調(diào)控序列是乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子。