Question

【題目】下圖為三種質(zhì)粒和一個(gè)含目的基因的DNA片段，其中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lacZ為藍(lán)色顯色基因，EcoRⅠ（0.7Kb），PvuⅠ（0.8Kb）等為限制酶及其切割位點(diǎn)與復(fù)制原點(diǎn)之間的距離．已知1kb=1000個(gè)堿基對的長度．

（1）片段D為目的基因中的某一片段，則DNA聚合酶和DNA連接酶的作用部位依次是（填數(shù)字）．
（2）圖中能作為目的基因運(yùn)載體最理想的質(zhì)粒是（填A(yù)/B/C）．據(jù)圖分析，其他兩種質(zhì)粒一般不能作為運(yùn)載體的理由分別是 ．
（3）用EcoRⅠ酶切目的基因和質(zhì)粒B形成的重組質(zhì)粒，并進(jìn)行電泳觀察，可出現(xiàn)長度分別為1.1kb和kb的兩個(gè)片段，或者長度分別為的兩個(gè)片段．
（4）將分別用限制酶PvuⅠ切開的質(zhì)粒B溶液與目的基因溶液混合，加入DNA連接酶連接后，進(jìn)行大腸桿菌受體細(xì)胞導(dǎo)入操作，之后，受體細(xì)胞的類型（對抗生素表現(xiàn)出抗性R或敏感性S，藍(lán)白代表菌落顏色）包含（ ）（多選）
A.ApR ， 藍(lán)色
B.ApR ， 白色
C.ApS ， 藍(lán)色
D.ApS ， 白色
（5）動物基因工程通常以受精卵作為受體細(xì)胞的根本原因是（ ）
A.受精卵細(xì)胞能使目的基因高效表達(dá)
B.受精卵可發(fā)育成動物個(gè)體
C.受精卵基因組更易接受DNA的插入
D.受精卵尺寸較大，便于DNA導(dǎo)入操作

Answer 1

【答案】
（1）②、②
（2）B；質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因；質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時(shí)，復(fù)制原點(diǎn)會被破壞
（3）5.6；3.1kb和3.6kb（或3.6kb和3.1kb）
（4）ABD
（5）B
【解析】解：（1）DNA聚合酶和DNA連接酶的作用部位均為磷酸二酯鍵，即圖中部位②．（2）圖中質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因；質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時(shí)，復(fù)制原點(diǎn)會被限制酶切割，會影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制．因此，能作為目的基因運(yùn)載體最理想的質(zhì)粒是B．（3）目的基因和質(zhì)粒B形成的重組質(zhì)粒長度為2.7﹣0.1+（4.0﹣1.0）=5.6kb（質(zhì)粒且切割后形成的大的片段+切割目的基因時(shí)形成的大片段）、0.1+1.0=1.1kb（質(zhì)粒且切割后形成的小的片段+切割目的基因時(shí)形成的小片段）或2.7﹣0.1+1.0=3.6（質(zhì)粒且切割后形成的大的片段+切割目的基因時(shí)形成的小片段）、0.1+3.0=3.6（質(zhì)粒且切割后形成的小的片段+切割目的基因時(shí)形成的大片段）．（4）將分別用限制酶PvuⅠ切開的質(zhì)粒B溶液與目的基因溶液混合，加入DNA連接酶連接后，導(dǎo)入大腸桿菌的可能是普通質(zhì)粒，也可能是重組質(zhì)粒，也可能是目的基因自身連接的DNA環(huán)．如果導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒，受體細(xì)胞的類型為A（ApR、藍(lán)色）；如果導(dǎo)入的是重組質(zhì)粒，受體細(xì)胞的類型為B（ApR、白色）；如果導(dǎo)入的是目的基因自身連接環(huán)，受體細(xì)胞的類型是D（ApS、白色）．（5）動物基因工程通常以受精卵作為受體細(xì)胞的根本原因是受精卵可發(fā)育成動物個(gè)體．
所以答案是：（1）②、②（2）B 質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因 質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時(shí)，復(fù)制原點(diǎn)會被破壞（3）5.6 3.1 kb和3.6kb （或3.6kb和3.1kb）（4）ABD（5）B
【考點(diǎn)精析】關(guān)于本題考查的基因工程的原理及技術(shù)，需要了解基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)才能得出正確答案．