Question

【題目】人乳頭狀瘤病毒（HPV）與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，抗HPV的單克隆抗體可以準(zhǔn)確檢測(cè)出HPV，從而及時(shí)監(jiān)控宮頸癌的發(fā)生�；卮鹣铝袉�(wèn)題：

（1）制備抗HPV的單克隆抗體時(shí)，給小鼠注入的抗原是__________，然后從小鼠體內(nèi)獲得能產(chǎn)生相應(yīng)抗體的細(xì)胞，這種細(xì)胞內(nèi)參與抗體合成和分泌的細(xì)胞器有__________。

（2）制備單克隆抗體過(guò)程中用到了小鼠的骨髓瘤細(xì)胞，這是因?yàn)樵摷?xì)胞具有__________的特點(diǎn)。B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合時(shí)，常用的誘導(dǎo)因素有__________等。

（3）在HAT培養(yǎng)基上能夠連續(xù)增殖的細(xì)胞是___________，該細(xì)胞所產(chǎn)生的抗體__________（填“一定”或“不一定”）能抗HPV。對(duì)HPV抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)時(shí)，先將培養(yǎng)液中的細(xì)胞濃度稀釋到3~10個(gè)/mL，然后在多孔細(xì)胞培養(yǎng)板的每個(gè)孔中只能加入0．1 mL細(xì)胞稀釋液，絕對(duì)不能多加，原因是__________。

Answer 1

【答案】HPV或HPV的蛋白質(zhì) 核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、線粒體 無(wú)限增殖 PEG、滅活的病毒、電激 雜交瘤細(xì)胞 不一定 使每個(gè)孔內(nèi)的細(xì)胞不多于一個(gè)，從而達(dá)到單克隆培養(yǎng)的目的

【解析】

單克隆抗體制備流程：

（1）對(duì)小鼠注射特定的抗原蛋白，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)；

（2）得到相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞；

（3）將小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合，再用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選；

（4）在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜種細(xì)胞才能生長(zhǎng)（這種雜種細(xì)胞的特點(diǎn)是既能迅速大量繁殖又能產(chǎn)生專(zhuān)一的抗體）；

（5）對(duì)上述雜交瘤細(xì)胞還需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，經(jīng)多次篩選，就可獲得足量的能分泌所需抗體的細(xì)胞；

（6）最后，將雜交瘤細(xì)胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，這樣，從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的單克隆抗體。

（1）制備抗HPV的單克隆抗體時(shí)，給小鼠注入的抗原是HPV或HPV的蛋白質(zhì)。小鼠體內(nèi)能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是漿細(xì)胞，抗體屬于分泌蛋白，漿細(xì)胞中參與抗體合成和分泌的細(xì)胞器有核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和線粒體。

（2）小鼠骨髓瘤細(xì)胞具有無(wú)限増殖的特點(diǎn)。B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合時(shí)常用的誘導(dǎo)因素有PEG、滅活的病毒、電激等。

（3）在HAT培養(yǎng)基上能夠連續(xù)増殖的細(xì)胞是雜交瘤細(xì)胞，該細(xì)胞所產(chǎn)生的抗體不一定能抗HPV，因?yàn)閺男∈篌w內(nèi)獲得的能產(chǎn)生抗體的漿細(xì)胞不只是專(zhuān)門(mén)針對(duì)HPV的，也有可能是其他抗原刺激后產(chǎn)生的，漿細(xì)胞產(chǎn)生的抗體是否是HPV抗體，還需要進(jìn)行檢測(cè)。單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原的抗體，對(duì)HPV抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆化培養(yǎng)時(shí)，先將培養(yǎng)液中的細(xì)胞濃度稀釋到3～10個(gè)/mL，然后在多孔細(xì)胞培養(yǎng)板的每個(gè)孔中只能加入0.1mL細(xì)胞稀釋液，絕對(duì)不能多加，因?yàn)槎嘤?/span>0.1mL的細(xì)胞稀釋液中就可能含2個(gè)或更多個(gè)細(xì)胞，這樣每個(gè)孔內(nèi)的細(xì)胞就不是一個(gè)，就達(dá)不到單克隆培養(yǎng)的目的。