Question

【題目】凝膠色譜法是60年代初發(fā)展起來的一種快速而又簡(jiǎn)單的分離技術(shù)，由于設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便，不需要有機(jī)溶劑，對(duì)高分子物質(zhì)有很高的分離效果，目前已經(jīng)在生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物工程學(xué)、分子免疫學(xué)等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，不但應(yīng)用于科學(xué)研究，而且已經(jīng)大規(guī)模地用于工業(yè)生產(chǎn)。據(jù)圖回答下列問題：

（1）a、b均為蛋白質(zhì)分子，其中先從層析柱中洗脫出來的是_______，原因是_________________。

（2）自己制作凝膠色譜柱時(shí)，在色譜柱底部d位置相當(dāng)于多孔板的結(jié)構(gòu)可由______替代。

（3）裝填凝膠色譜柱時(shí)，色譜柱內(nèi)不能有氣泡的存在，原因是__________________。

（4）洗脫時(shí)對(duì)洗脫液的流速要求是___。若選用SephadexG-75,則“G”表示________；“75”表示________________________。

Answer 1

【答案】a a相對(duì)分子質(zhì)量大，無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快 尼龍網(wǎng)和尼龍紗 氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果 保持穩(wěn)定 凝膠的交聯(lián)程度、膨脹程度及分離范圍 凝膠得水值，即每克凝膠膨脹時(shí)吸水7.5g

【解析】

題圖所給是分離蛋白質(zhì)的方法是根據(jù)蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量的大小進(jìn)行的分離。熟悉記憶血紅蛋白提取和鑒定實(shí)驗(yàn)的原理、操作步驟、注意事項(xiàng)是答題的關(guān)鍵．

（1）相對(duì)分子質(zhì)量大的物質(zhì)，無法進(jìn)入凝膠珠中的通道孔，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快，因此a先從層析柱中洗脫出來．

（2）制作凝膠色譜柱時(shí)，在色譜柱底部d位置相當(dāng)于多孔板的結(jié)構(gòu)由尼龍網(wǎng)和尼龍紗替代．

（3）裝填凝膠色譜柱時(shí)，色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，因?yàn)闅馀輹?huì)擾亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果．

（4）洗脫時(shí)從色譜柱上端不斷注入緩沖液，促使蛋白質(zhì)分子的差速流動(dòng)，對(duì)洗脫液的流速要求是保持穩(wěn)定．交聯(lián)葡聚糖凝膠（SephadexG-75）“G”表示凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分離范圍，75表示凝膠得水值，即每克凝膠膨脹時(shí)吸水7.5克．